копий 100 тыс клеток что значит
Молекулярно-биологические методы диагностики ВПЧ-инфекции
Молекулярно-биологические методы предоставляют информацию о развитии ВПЧ-инфекции, но не позволяют судить о наличии заболевания, поскольку факт инфицирования ВПЧ не всегда сопряжен с заболеванием. Два основных метода диагностики ДНК ВПЧ — полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени и метод гибридного захвата (Digine-тест). Оба метода практически не отличаются по чувствительности и специфичности, однако, сертифицирован и одобрен FDA только Digene-тест.
Технология Digene-теста основана на гибридном захвате и заключается в уникальном способе связывания вирусной ДНК с РНК-зондом, захвате полученного гибрида моноклональными антителами и хемилюминисцентной детекции образуемых комплексов.
По сути это качественный тест, который применяется для профилактического скрининга для ранней диагностики патологии шейки матки. Тест идентифицует 13 генотипов высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и 5 генотипов низкого риска (6, 11, 42, 43, 44).
Тест одобрен Федеральной службой РФ по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (ФСНСЗСР). Digene-тест выявляет клинически значимый уровень инфицирования вирусом папилломы человека, который приводит к развитию неоплазии шейки матки. Положительный результат теста выдается в единицах Digine. Отрицательный тест практически исключает CIN II и CIN III.
Обнаружение ДНК ВПЧ в качественном формате
ДНК ВПЧ длительно сохраняется в образцах тканей, поэтому ее легко можно идентифицировать. Для определения достаточно минимального количества исследуемого образца. «Качественное» определение ДНК ВПЧ имеет спорную клиническую значимость, поскольку указывает только на факт наличия вируса, не позволяя сделать прогноз относительно течения инфекции. В большинстве случаев инфекция элиминируется самостоятельно.
Количественное определение вируса ВПЧ
Количественный анализ ДНК ВПЧ наиболее чувствителен на ранних этапах папилломавирусной инфекции, когда отсутствуют другие признаки инфицирования. Например, цитологические, клинические. Метод количественного определения используется в качестве скрининга, особенно в рамках национальных программ контроля рака шейки матки, а также для оценки эффективности терапии.
Количественные ПЦР-методы направлены на максимальную чувствительность выявления вирусной ДНК, однако, не всегда существуют прямые клинические корреляции.
Одним из критериев клинически значимой инфекции, которая с высокой степенью вероятности способна развиться в неоплазию, рассматривается вирусная нагрузка. Вирусная нагрузка 3 lg на 105 клеток является клинически малозначимой, поскольку сопровождается минимальным риском дисплазии и почти в 100% случаев заканчивается спонтанной регрессией. Вирусная нагрузка больше 5 lg на 105 клеток считается повышенной и сопряжена с высоким риском развития дисплазии. Снижение вирусной нагрузки на 1 lg за 6 месяцев говорит о транзиторной инфекции.
Прогностическая ценность вирусной нагрузки на сегодняшний день однозначно не определена.
Генотипирование вируса методом ПЦР позволяет определить тип вируса ВПЧ и его онкогенность. Этот метод подходит для выявления персистенции ВПЧ и позволяет отличить случаи реинфекции. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистентной инфекции — сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования.
При инфицировании несколькими генотипами ВПЧ одновременно, прогноз течения заболевания менее благоприятный, а риск персистенции и риск развития РШМ по сравнению с инфицированием одним типом более высокий.
Выявление ВПЧ высокого риска свидетельствует о наличие папилломавирусной инфекции. ВПЧ высококанцерогенного риска имеют различный онкогенный потенциал. На долю самых опасных, 16 и 18, приходится около 70% всех случаев цервикального рака. Генотипирование на ВПЧ 16 и 18 позволяет выделить группу женщин, которые имеют повышенный риск развития цервикального рака.
Рекомендации ВОЗ по профилактике рака шейки матки
Вирус папилломы человека и рак шейки матки
ВПЧ, или вирусы папилломы человека, широко распространены по всему миру. Известно более 100 различных типов ВПЧ. Большинство населения являются носителями по меньшей мере одного из типов вируса, а чаще всего нескольких типов одновременно. Большинство ВПЧ никак себя не проявляют, и человек является лишь носителем. Некоторые типы вызывают образование папиллом и других изменений на коже и слизистых оболочках. С наличие ВПЧ связывают образование бородавок, папиллом гортани, но в основном эти вирусы не опасны.
Наибольшую опасность представляют типы ВПЧ, способные вызвать изменения, ведущие к развитию опухолей. Такие ВПЧ называют высокоонкогенными. Рак шейки матки – серьёзное онкологическое заболевание, ассоциированное с ВПЧ. Отличается долгим периодом предраковых изменений, в течение которого можно выявить изменения клеток и своевременно провести лечение.
Для того, чтобы не допустить развитие рака шейки матки, очень важно:
От дисплазии начальной стадии до развития рака обычно проходит несколько лет. Своевременное выявление ВПЧ и дисплазии позволяет предотвратить рак
Скрининг рака шейки матки – идеальный тест для регулярного обследования.
В основе одновременное проведение жидкостной цитологии и ВПЧ- теста, что важно для полноценной оценки изменений.
Жидкостная цитология – автоматизированная стандартизованная методика выполнения тонкослойных мазков, позволяющая под микроскопом разглядеть каждую клетку с целью выявления ее изменений, в том числе онкологической трансформации. Исследуется смешанный соскоб из цервикального канала и шейки матки, взятый специальной щёточкой, которая позволяет достичь зоны перехода плоского эпителия шейки матки в эпителий цервикального канала (железистые клетки). В этой зоне чаще всего развиваются опухолевые клетки. Помещение полученного материала в специальную виалу и окраска по Папаниколау увеличивает качество и точность исследования.
ВПЧ тест включает определение:
Ответ выдается в формате «обнаружено/не обнаружено». Результат «обнаружено» означает, что вирус выявлен в том количестве, которое требует наблюдения и/или лечения.
Дело в том, что ВПЧ –достаточно капризные вирусы. Они могут попадать в организме и спонтанно исчезать при хорошем иммунитете у пациента. Основные пути передачи – контактный и половой, поэтому возможно повторное заражение или проявление вируса при ослаблении иммунитета. Известны случаи, когда ВПЧ то обнаруживается, то не обнаруживается. Обычно эта ситуация бывает при небольшом количестве вируса и зависит ни от пациента, ни от врача. Всё дело в особенностях жизнедеятельности вируса и процессе его противостояния с иммунитетом.
В чём преимущества Скрининга рака шейки матки по сравнению с другими тестами, выявляющими ВПЧ?
Одновременное проведение цитологического исследования и ВПЧ теста – стратегия максимально выявить риски.
Во-первых, выявление ВПЧ в том количестве, которое является значимым, позволяет спланировать визит к врачу, наблюдаться и провести необходимое лечение, если надо.
Для того, чтобы исследование было максимально достоверным, важно правильно подготовиться:
Регулярное обследование – способ сохранить здоровье на долгие годы.
Копий 100 тыс клеток что значит
Исследование используется для диагностики папиллома-вирусной инфекции, с одновременным определением количества вирусной ДНК в исследуемом материале. Анализ позволяет сделать вывод о степени поражения слизистой, оценить эффективность терапии в процессе лечения. Определяется суммарное количество ДНК 14 типов ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) с отдельным определением ДНК ВПЧ 16-го, 18-го и 45-го генотипов. Тест также позволяет оценить вероятность интеграции ВПЧ 16-го, 18-го и 45-го типа в геном человека (что является опасным и прогностически неблагоприятным фактором).
Папиллома-вирусы высокого канцерогенного риска, вирусы папилломы высокого канцерогенного риска, ВПЧ высокого канцерогенного риска.
Human Papillomavirus, DNA; HPV, Viral Load.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Вирусы папилломы человека (ВПЧ) представляют собой широко распространённую и вариабельную группу вирусов, поражающих эпителий кожи и слизистых оболочек и обладающих онкогенным потенциалом. ВПЧ передаётся при тесном контакте с инфицированным эпителием, поэтому основные пути заражения – половой и контактно-бытовой. Возможна передача ВПЧ от инфицированной матери к плоду.
К факторам, провоцирующим развитие ВПЧ-инфекции, относятся ранее начало половой жизни, большое количество половых партнеров, сниженный иммунитет, применение оральных контрацептивов, авитаминозы, инфекции, передаваемые половым путём, курение и проживание в крупных городах.
Инкубационный период может длиться от 2 месяцев до 2-10 лет. Характерно скрытое течение заболевания, при котором отсутствуют клинические проявления, а при кольпоскопическом, цитологическом и гистологическом обследовании выявляется норма. В 30 % случаев в течение 6-12 месяцев может произойти избавление от вируса. Диагностика скрытой ВПЧ-инфекции осуществляется только методом ПЦР.
ВПЧ может по-разному воздействовать на эпителий: способствовать возникновению доброкачественных образований (папиллом, кондилом) или объединению ДНК папиллома-вируса с геном клетки, что приводит к дисплазии (неоплазии) и в дальнейшем к раку (чаще всего в переходной зоне шейки матки).
К папиллома-вирусам высокого онкогенного риска относятся ВПЧ типов 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68.
Для выявления возбудителя используется метод полимеразной цепной реакции, которая позволяет обнаружить ДНК вируса. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять генетический материал возбудителя на ранних этапах заболевания. Он характеризуется высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности, быстротой получения конечного результата и доступностью. Особенностью метода является возможность выявлять ДНК вируса даже при малом содержании её в исследуемом биологическом материале. Метод основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК. Для диагностики может использоваться разнообразный биологический материал, взятый у детей, взрослых лиц, людей с патологией иммунной системы, беременных женщин. Метод позволяет определять количество молекул ДНК исследуемого вируса, что является важным в диагностике острой формы инфекции, реактивации персистентной инфекции, носительстве вируса, а также при контроле эффективности проводимой противовирусной терапии.
По данным исследований, количественное содержание вируса в материале коррелирует со степенью неоплазии: чем выше вирусная нагрузка, тем выраженнее цитологические изменения в эпителии. При обследовании необходимо учитывать генотип вируса, наличие и степень цитологических и гистологических изменений в тканях, увеличение или снижение вирусной нагрузки через несколько месяцев (6 месяцев и более) после предыдущего обследования.
В исследовании проводится определение суммарного количества ДНК 14 типов ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) с отдельным определением ДНК ВПЧ 16, 18 и 45 генотипов. ВПЧ ВКР являются главной этиологической причиной развития РШМ и предшествующей ему тяжелой дисплазии. ВПЧ обнаруживается в 95 % случаев РШМ, из них 16, 18, 45 генотипы в совокупности являются причиной 75 % плоскоклеточных раков и 94 % аденокарцином шейки матки.
Известно, что развитие РШМ часто ассоциировано с интеграцией ДНК вируса в геном клетки-хозяина. Наиболее часто интегрируют ВПЧ 16 и 18 генотипов, при этом происходит разрыв участка Е1/Е2 при сохранении онкогена Е6/Е7. В тест-системе, на которой выполняется данное исследование, по разным каналам прибора детектируются разные участки генома ВПЧ 16, 18 и 45 типов. Выявление области Е6 при отсутствии области Е1/Е2 позволяет косвенно судить о возможности интеграции вируса в геном человека. В случае обнаружения возможности интеграции вируса в геном в бланк ответа выводится соответствующая информация.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Уровень вирусной нагрузки интерпретируется с учетом результатов цитологического исследования мазков, гистологических изменений в биоптате и генотипа вируса, изменении его количества с течением времени.
Кто назначает исследование?
Цена: 600 руб.
Материал: Урогенитальный соскоб, моча, эякулят
Время забора: 7:00-18:30 сб. 7:00-13:00 вс. 8:00-11:00
Выдача результатов: Через 1 рабочий день
Условия подготовки к анализам:
Не мыться и не мочиться 2 часа.
Тест, направленный на количественное определение ДНК вируса папилломы человека 14 типов высокого онкогенного риска: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта.
Вирус папилломы человека (ВПЧ) может быть причиной возникновения рака гениталий у женщин и плоскоклеточного рака у мужчин и женщин. Доказано, что этот вирус является причиной возникновения остроконечных кондилом, кондилом и новообразований шейки матки. Различные виды ВПЧ являются причиной различных поражений. Некоторые из них являются факторами высокого онкогенного риска.
Аналитические показатели:
Формат выдачи результата включает суммарное количество по всем указанным типам ВПЧ в lg(ВПЧ на 100 тыс. клеток).
Подготовка
Для мужчин: За 1–2 суток до взятия мазка (соскоба) необходимо исключить половые контакты. Не рекомендуется взятие биоматериала на фоне проведения антибактериальной терапии (общей / местной). Нельзя мочиться в течение 1,5-2 часов до процедуры.
Показания
Интерпретация результата
Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.
Копий 100 тыс клеток что значит
Исследование, направленное на обнаружение генетического материала (ДНК) вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска с генотипированием 16 и 18 типов вируса. Выявляется 14 генотипов ВПЧ на основе метода полимеразной цепной в режиме реального времени с мультиплексной детекцией (Roche Cobas 4800).
Вирус папилломы человека высокого канцерогенного риска; ВПЧ высокого канцерогенного риска; ДНК [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени, Roche Cobas 4800].
Human Papillomavirus; HPV; high carcinogenic risk; DNA [polymerase chain reaction, real-time PCR, Roche Cobas 4800].
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок смешанный из цервикального канала и поверхности шейки матки.
Общая информация об исследовании
Вирус папилломы человека (ВПЧ или HPV) представляет собой семейство ДНКсодержащих вирусов, являющихся причиной различных поражений кожи и слизистых оболочек человека. Известно более 100 типов ВПЧ, которые могут быть ассоциированы с появлением бородавок, папиллом, остроконечных и плоских кондилом, предраковых изменений (дисплазий) и рака шейки матки, влагалища, вульвы, рака прямой кишки, полового члена и новообразований некоторых других локализаций (например, орофарингеальной карциномы). Источником инфекции является больной человек или вирусоноситель. Основным путем передачи инфекции является половой путь. Возможно также заражение через бытовые предметы общего пользования и вертикальный путь передачи, от инфицированной женщины к ребенку во время беременности или родов.
Различают генотипы ВПЧ, инфицирование которыми приводит к развитию доброкачественных процессов, и тех, которые обладают высоким риском злокачественного перерождения. Генотипы ВПЧ 1, 2, 3, 4, 5, 10, 28, 49 относятся к неонкогенным; генотипы 6, 11, 13, 32, 34, 40, 41, 42, 43, 44 имеют низкий онкогенный риск; генотипы 26, 30, 53, 65 обладают средним онкогенным риском; генотипы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, относятся к ВПЧ высокого канцерогенного риска и 66, 68 относятся к типам вероятного риска для человека. В составе генома онкогенных типов ВПЧ имеются участки, ответственные за синтез определенных белков. Онкопротеины Е6 и Е7 подавляют процессы апоптоза (запрограммированной клеточной гибели) в клетках с измененным генетическим материалом. Они играют большую роль в развитии злокачественного опухолевого процесса. Участки генома L1 и L2 ответственны за синтез структурных белков капсидной оболочки вируса.
Инфицирование высокоонкогенными типами ВПЧ может быть ассоциировано с развитием цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН/CIN) и рака шейки матки у женщин. Рак шейки матки занимает третье место в структуре заболеваемости женщин России злокачественными новообразованиями. В большинстве случаев, в 90 %, онкологический процесс представлен плоскоклеточной карциномой, реже – другими гистологическими вариантами (аденокарцинома и аденоплоскоклеточная карцинома). Длительная персистенция вируса и высокий уровень его содержания может быть ассоциирован с тяжестью заболевания.
К основному методу скрининга рака шейки матки и предраковых состояний относится цитологическое исследование по Папаниколау (мазок по Папаниколау). Согласно общепринятым рекомендациям, его проводят всем женщинам в возрасте от 21 года вне зависимости от возраста начала половой жизни с интервалом 3 года до достижения 65 лет. Для женщин в возрасте 30-65 лет может быть использована альтернативная скрининговая программа с интервалом 5 лет, предполагающая одновременное проведение двух анализов: цитологическое исследование по Папаниколау и ДНК-тестирование ВПЧ методом полимеразной цепной реакции. Следует отметить, что в молодом возрасте ВПЧ может спонтанно элиминироваться из организма и не детектироваться с помощью современных методов. При этом в 70 % случаев в течение первого года и в 90 % случаев через два года после инфицирования возможно самоизлечение.
Использование комбинированной диагностики (цитологического исследования и ДНК-тестирования) повышает эффективность обнаружения предраковых состояний, ЦИН 2 и 3 степени выраженности, рака шейки матки.
К современным методам диагностики относится метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (реал-тайм ПЦР). Полимеразная цепная реакция – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять генетический материал исследуемого возбудителя. Он характеризуется высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности, быстротой получения конечного результата и доступностью. Особенностью метода является возможность выявлять ДНК (дезоксирибонуклеиновую кислоту) вируса даже при малом содержании её в исследуемом биологическом материале. Метод основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК.
Анализатор и тест-система Roche Cobas 4800 сочетает в себе автоматизированную подготовку проб для исследования и обнаружение 14 генотипов ВПЧ на основе метода ПЦР в режиме реального времени с мультиплексной детекцией. Это позволяет генотипировать и определять наличие ВПЧ 16 и ВПЧ 18 типов, а также пул из 12 типов ВПЧ высокого канцерогенного риска (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68). В качестве внутреннего контроля реакции используется β-глобин человека. Использование метода реал-тайм ПЦР Roche Cobas 4800 для скринингового определения генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска является рекомендованным, апробированным и клинически проверенным. Применение данного диагностического метода позволяет одновременно генотипировать вирус на ВПЧ 16 и ВПЧ 18. Данные типы вируса относятся к наиболее канцерогенным и ассоциированным с клинически значимым риском развития ЦИН 3 степени или рака шейки матки. Генотип ВПЧ 16 чаще встречается при плоскоклеточной карциноме, а ВПЧ 18 при аденокарциноме. Таким образом, возможно выявление генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска, прогнозирование риска развития инфекции, ЦИН и рака шейки матки, а также определение тактики, контроля проводимой терапии и оценки возможности развития рецидива после лечения.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?