что такое сероконверсия вируса
Иммуногенность новой гриппозной вакцины
Грипп и гриппоподобные заболевания занимают первое место по частоте и количеству случаев в мире. Эпидемия гриппа ежегодно приходит с наступлением осенне-зимнего сезона, и каждый раз иммунная система не готова к встрече с
Грипп и гриппоподобные заболевания занимают первое место по частоте и количеству случаев в мире. Эпидемия гриппа ежегодно приходит с наступлением осенне-зимнего сезона, и каждый раз иммунная система не готова к встрече с ним. Почему? Грипп является чемпионом среди вирусов по способности к генетической изменчивости, которая позволяет ему уходить от иммунного надзора. Вирус с изменившимися поверхностными белками уже не распознается специфическими противогриппозными антителами к штаммам-предшественникам.
Наиболее эффективным, безопасным и экономически оправданным средством профилактики гриппа является вакцинация. Чтобы вакцина защищала от гриппа, должно быть четкое соответствие вакцинных штаммов эпидемическим. В отличие от большинства других вакцинных препаратов, существует необходимость ежегодного обновления штаммового состава противогриппозных вакцин и, следовательно, необходимость ежегодной иммунизации. Проблема гриппа давно вышла за пределы одной страны. Центрами по гриппу ВОЗ, организованными по всему миру, проводится регулярный мониторинг и сбор информации по сезонным циркулирующим штаммам вируса гриппа и вспышкам заболеваемости. На основании анализа присланного материала эксперты делают прогнозы относительно разновидностей гриппа, которые будут циркулировать в следующем эпидсезоне, а также предлагают вирусы-кандидаты в вакцинные штаммы для производителей.
С учетом того, что дифференциальная диагностика гриппа от других ОРВИ затруднена, показатели иммуногенности вакцин принято оценивать по уровню специфических антител к гемагглютинину (ГА). Защитный эффект ГА-специфических антител неоднократно был продемонстрирован как у животных, так и у людей. Антитела нейтрализуют вирус гриппа, предотвращая его связывание с рецепторами, при этом уровень антител к гемагглютинину напрямую коррелирует с уровнем защищенности. При оценке потенциальной эффективности вакцины титр антител не менее чем 1:40 считают защитным. Антитела к другому изменчивому поверхностному белку вируса гриппа — нейраминидазе — не могут предотвратить инфекцию, однако играют важную роль в защите от тяжелых форм гриппа, препятствуя выходу вирусных частиц из инфицированных клеток и дальнейшему распространению вируса в организме. Гемагглютинин и нейраминидаза названы протективными белками, а вакцины, содержащие только эти очищенные белки, — субъединичными.
Современные достижения вирусологии, развитие технологий фармацевтической индустрии, интеграция исследователей разных стран в сфере контроля и борьбы с гриппом позволили вывести на новый уровень разработку и производство гриппозных вакцин. Вакцина Гриппол® Нео — результат международного сотрудничества двух компаний («Солвей Биолоджикалз Б. В.» и ФК «ПЕТРОВАКС»). Эта субъединичная вакцина содержит иммуноадъювант Полиоксидоний® и антигены (гемагглютинин и нейраминидазу) европейского качества, полученные из вируса, выращенного на культуре клеток. Рост вируса для вакцины осуществляется по современной технологии с использованием клеточной линии MDCK (Madine-Darbin Canine Kidney) в бессывороточной среде и является стандартизированным закрытым процессом, исключающим возможность контаминации любыми, в том числе неизвестными агентами. Применение культур клеток для наработки вирусного материала стало уже традиционным для целого ряда вакцинных препаратов. Но только благодаря разработкам специалистов компании «Солвей Биолоджикалз» технология стала доступной и для гриппозных вакцин. В 2001 году была зарегистрирована вакцина Инфлювак ТС (Нидерланды), в 2009 году в России — Гриппол ® Нео.
Снижение антигенной нагрузки в вакцинирующей дозе обеспечивает максимальный профиль безопасности препарата. Антигены с адъювантом образуют комплекс, который стимулирует гуморальное и клеточное звенья иммунитета. Это приводит к образованию специфических к протективным белкам антител, отвечающих за защиту от гриппа, и повышает общую резистентность организма к инфекции.
Клинические исследования безопасности и иммуногенности Гриппол ® Нео проводились с участием добровольцев в высокоспециализированных исследовательских центрах по изучению вакцинных препаратов и поствакцинальных реакций.
Материалы и методы
Вакцины
В клиническом испытании были использованы три инактивированные субъединичные вакцины, содержащие иммуноадъювант Полиоксидоний® и антигены (гемагглютинин и нейраминидазу) актуальных для эпидемического сезона 2008/2009 штаммов вируса гриппа: H1N1 A/Brisbane/59/2007; H3 N2 A/Uruguay/716/2007; B/Florida/4/2006. Два тестируемых препарата представляли собой две серии вакцины Гриппол® Нео производства ООО «ФК «ПЕТРОВАКС», содержащие по 5 либо по 10 мкг гемагглютинина каждого из трех штаммов и 500 мкг Полиоксидония®. В качестве препарата сравнения использовали коммерческую вакцину Гриппол® производства ФГУП «НПО «Микроген», содержащую по 5 мкг ГА штаммов вирусов гриппа типа А (H1N1 и H3N2), 11 мкг гемагглютинина вируса гриппа типа В, 500 мкг Полиоксидония®. Препараты, используемые в исследовании, были контролированы в ГИСК им. Л. А. Тарасевича на соответствие нормативной документации; испытуемые серии Гриппол® Нео и препарат сравнения зашифрованы специалистами ГИСКа, не принимающими участия в данном исследовании. Дешифровка была проведена после завершения клинического исследования и представления всех результатов в ГИСК.
Дизайн исследования
Исследования проведены в соответствии с утвержденными протоколами и согласно разрешению МЗ РФ на клинических базах ФГУ НИИ ДИ Росздрава и ГОУ ВПО СПбГМУ им. ак. И. П. Павлова в соответствии с требованиями Надлежащей клинической практики (GCP).
Дизайн исследования: рандомизированное, двойное слепое, контролируемое сравнительное в параллельных группах. Вакцинация добровольцев проведена после подписания информированного согласия.
Участники были отобраны в соответствии с критериями включения/исключения, определенными протоколом клинического испытания. Всего было вакцинировано 300 здоровых добровольцев в возрасте 18–55 лет (средний возраст — 24,5 ± 0,5 года). Перед прививкой все добровольцы были осмотрены врачом, было проведено измерение температуры тела, артериального давления, женщинам — тест на беременность.
Методом случайного выборочного распределения было сформировано три группы по 100 человек. Вакцинацию проводили однократно в дельтовидную мышцу в объеме 0,5 мл.
Постановка реакции и учет результатов
Парные сыворотки добровольцев, взятые до и через 21 день после вакцинации, исследовали с помощью стандартной методики в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), как описано в МУ 3.3.2 1758–03. Постановка РТГА включала следующие этапы: подготовка сывороток, определение гемагглютинирующего титра в РГА и рабочей дозы вируса, постановка самой реакции. Для удаления неспецифических ингибиторов сыворотку обрабатывали RDE по методу, описанному в инструкции к препарату. В качестве рабочей дозы антигена использовалась доза 4АЕ, приготовленная из диагностикумов «Диагностикумы гриппозные для реакции торможения гемагглютинации сухие» (ФСП 42–0321–4042–03) трех штаммов, соответствующих вакцинным. Сыворотки титровали начиная с разведения 1:10. При учете результатов титр 1:1280 — равным 1:1280.
Иммуногенность оценивали в соответствии с требованиями Европейского комитета к противогриппозным вакцинам (СPMP/BWP/214/96), согласно которым должен выполняться по крайней мере один из трех критериев:
Статистика
Результаты исследований статистически обработаны с использованием t-критерия Стьюдента. Вариационный анализ полученных результатов проводили с применением пакета прикладных программ Statistica 6.0.
Результаты и обсуждение
Серологическое обследование с целью оценки иммунологической эффективности вакцинации проводили, сравнивая уровень антител в парных сыворотках, взятых до прививки и на 21-й день после вакцинации. Во всех экспериментальных группах в сыворотках привитых регистрировали статистически достоверное нарастание титров антител. По всем анализируемым критериям не наблюдалось статистически достоверной разницы в иммунном ответе на серии вакцины Гриппол® Нео с различными дозировками антигенов. В таблицах приведены данные, относящиеся к серии, содержащей по 5 мкг гемагглютинина каждого штамма.
Подсчеты числа лиц с серопротекциями (защитными титрами антител (≥ 1:40)) показали, что в каждой группе уровень этих антител соответствует критерию CPMP (табл. 1).
Известно, что человеческая популяция неоднородна по наличию антител к различным штаммам и подтипам вируса гриппа вследствие гриппозных эпидемий и предыдущих вакцинаций. Среди вакцинированных добровольцев выявлены как серонегативные, так и серопозитивные участники (исходно имевшие защитный титр). Представлялось интересным оценить эффективность иммунизации в общей популяции людей (табл. 3).
Выводы и заключение
В настоящее время вакцина Гриппол ® Нео зарегистрирована (РУ № ЛСР-006029/09 от 23.07.2009 г.). Таким образом, семейство вакцин Гриппол ® пополнилось новым полноправным членом, а профилактическая медицина обрела новый инструмент для контроля такого заболевания, как грипп. Гриппол ® Нео стал первой в мире субъединичной адъювантной вакциной с клеточной технологией получения антигенов. При этом впервые вакцинация против гриппа разрешена людям с аллергией на белок куриного яйца. Исследования по расширению показаний к применению вакцины продолжаются.
Е. М. Войцеховская *
В. С. Вакин *, кандидат медицинских наук
А. А. Васильева *
Е. В. Кузнецова *, кандидат биологических наук
Н. И. Лонская **, кандидат медицинских наук
Г. А. Ельшина **, кандидат медицинских наук
М. А. Горбунов **, доктор медицинских наук
А. А. Соминина *, доктор медицинских наук
Ю. А. Зайцева ***
* ГУ НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург
** ФГУН ГИСК им. Л. А. Тарасевича Роспотребнадзора, Москва
*** ООО ФК «ПЕТРОВАКС», Москва
Ключевые слова: вакцина, грипп, Гриппол ® Нео, клеточная культура
Сероконверсия
Смотреть что такое «Сероконверсия» в других словарях:
сероконверсия — Появление в сыворотке крови больного специфических антител [http://www.dunwoodypress.com/148/PDF/Biotech Eng Rus.pdf] Тематики биотехнологии EN seroconversion … Справочник технического переводчика
СЕРОКОНВЕРСИЯ — (seroconversion) выработка специфических антител в ответ на наличие какого либо антигена (например, вакцины или вируса) … Толковый словарь по медицине
Сероконверсия (Seroconversion) — выработка специфических антител в ответ на наличие какого либо антигена (например, вакцины или вируса). Источник: Медицинский словарь … Медицинские термины
бессимптомная сероконверсия — Изменение серологического статуса организма в отношении инфекционного агента без клинического проявления заболевания [http://www.dunwoodypress.com/148/PDF/Biotech Eng Rus.pdf] Тематики биотехнологии EN asymptomatic seroconversion … Справочник технического переводчика
Беременность — I Беременность Беременность (graviditas) физиологический процесс развития в женском организме оплодотворенной яйцеклетки, в результате которого формируется плод, способный к внеутробному существованию. Возможно одновременное развитие двух и более … Медицинская энциклопедия
Специфичный (Specific) — 1. Лекарственное вещество, обладающее особыми свойствами, которые используются для лечения различных заболеваний. 2. По отношению к заболеванию болезнь, вызванная специфическим микроорганизмом (который приводит к развитию только данной болезни и… … Медицинские термины
Зеффикс — Действующее вещество ›› Ламивудин* (Lamivudine*) Латинское название Zeffix АТХ: ›› J05AF05 Ламивудин Фармакологическая группа: Противовирусные средства Нозологическая классификация (МКБ 10) ›› B18.0 Хронический вирусный гепатит B с дельта агентом … Словарь медицинских препаратов
Имовакс Полио — Латинское название Imovax Polio АТХ: ›› J07BF03 Вирус полиомиелита — трехвалентный инактивированный Фармакологическая группа: Вакцины, сыворотки, фаги Нозологическая классификация (МКБ 10) ›› B91 Последствия полиомиелита Состав и форма… … Словарь медицинских препаратов
Пегасис — Действующее вещество ›› Пэгинтерферон альфа 2а (40 кДа)* (Peginterferon alfa 2a (40 KD)*) Латинское название Pegasys АТХ: ›› L03AB11 Пэгинтерферон альфа 2a Фармакологическая группа: Иммуномодуляторы Состав и форма выпуска Раствор для подкожного… … Словарь медицинских препаратов
Полио Сэбин Веро — Латинское название Polio Sabin Vero Фармакологическая группа: Вакцины, сыворотки, фаги Нозологическая классификация (МКБ 10) ›› B91 Последствия полиомиелита Состав и форма выпуска Раствор для приема внутрь. 1 доза вакцины (2 капли или 0,5 мл) в… … Словарь медицинских препаратов
Вирусные гепатиты
Вирусный гепатит А
Гепатит А (ГА, hepatitis A) — острая энтеровирусная инфекция. Возбудитель — вирус гепатита А (ВГА, HAV) — энтеровирус типа 72. Геном вируса представлен однонитчатой РНК. Вирус гепатита А содержит единственный антиген (HA-Ag). Удельный вес гепатита А в суммарной заболеваемости вирусными гепатитами составляет 70–80 %. В структуре заболеваемости гепатитом А дети составляют до 80%, причем основная масса — дошкольники и школьники начальных классов.
Антитела IgM к вирусу гепатита А
Антитела IgM к вирусу гепатита А в сыворотке в норме отсутствуют. Достоверное подтверждение диагноза ГА достигается серологическими методами — обнаружением нарастания уровня специфических антител (анти-HAV), принадлежащих к иммуноглобулинам класса М (анти-HAV IgM). При гепатите А нарастание уровня антител, относящихся к IgM, начинается еще в инкубационном периоде, за 5–10 дней до появления первых симптомов болезни, и быстро прогрессирует. К моменту первичного обращения больного к врачу, уровень анти-HAV IgM успевает достичь высоких показателей, чтобы быть выявленным методом ИФА. Общепринято, что анти-HAV IgM у больных обнаруживаются в начале клинических проявлений заболевания и сохраняются до 6 мес после перенесенной инфекции.
Определение анти-HAV IgM
В настоящее время выделяют следующие формы вирусных гепатитов: гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D и гепатит Е. Для диагностики каждой из перечисленных форм вирусных гепатитов используют определенный перечень маркеров.
Определение анти-HAV IgG
Основной тест специфической диагностики гепатита А. Нарастание анти-HAV IgG происходит в более поздние сроки — в фазу реконвалесценции — и поэтому не может служить критерием ранней диагностики гепатита А. Выявление анти-HAV IgG у здоровых людей (возможно у 30–60% здорового населения) свидетельствует о предыдущей инфекции и иммунитете (ретроспективная диагностика).
Антиген гепатита А — HA-Ag
Появляется в сыворотке крови в конце преджелтушного периода. У большинства больных сохраняется в сыворотке крови на протяжение 1–2 недель заболевания. Из-за кратковременности пребывания в сыворотке крови больного для диагностических целей не используется.
Вирусный гепатит В
Гепатит В — вирусная антропонозная инфекция. Возбудитель — вирус гепатита В (ВГВ, HBV) — относится к семейству гепаднавирусов, ДНК-содержащих вирусов, поражающих клетки печени. Вирионы ВГВ имеют наружную липопротеидную оболочку и нуклеокапсид, содержащий двунитчатую циркулярную ДНК и ДНК-зависимую ДНК-полимеразу.
Поверхностный антиген (HBsAg) гепатита В в сыворотке
Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке в норме отсутствует. Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В (HBV).
При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1–2 недели инкубационного периода и в первые 2–3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Частота выявления HBsAg зависит от чувствительности используемого метода исследования. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBcAg IgM. Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.
Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и средне-тяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах, концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный прогностический признак; он определяется при злокачественных формах (фульминантных) гепатита В.
При остром течении гепатита В, концентрация HBsAg в крови постепенно снижается, вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 мес от начала острой инфекции. Снижение концентрации HBsAg более чем на 50 % к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев. У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом, срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4–5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 мес от начала заболевания.
HBsAg может быть выявлен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В — анти-HBcAg IgM, анти-НВс IgG, анти-HBeAg и изучают функцию печени. При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg. Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого человека относят к хроническим носителям поверхностного антигена. Носительство HBsAg — довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн носителей; у нас в стране — около 10 млн.
Исследование крови на наличие HBsAg применяют в следующих целях:
Антитела к поверхностному антигену гепатита В
Анти-HBsAg обнаруживаются в конце острого периода вирусного гепатита В или, чаще всего, через 3 мес от начала инфекции, изредка позже (до года) и сохраняются долго, в среднем 5 лет (Хазанов А.И., 1981). Анти-HBsAg обнаруживаются не сразу после исчезновения HBsAg. Продолжительность фазы «окна» варьирует от нескольких недель до нескольких месяцев. Антитела к поверхностному антигену гепатита В нейтрализуют вирус и рассматриваются как признак иммунитета. Они относятся к классу IgG.
Определение анти-HBsAg имеет важное значение для оценки течения гепатита В и его исходов, так как характеризует иммунный ответ конкретного больного. Это надежный критерий развития постинфекционного иммунитета и выздоровления. Выявление анти-HBsAg может служить критерием ретроспективной диагностики гепатита ранее не уточненной этиологии.
Анти-HBsAg свидетельствуют о ранее перенесенной инфекции. Выявление антител к HBsAg играет важную роль в определении контингента для вакцинации против гепатита В. Согласно рекомендациям ВОЗ, если уровень анти-HBsAg составляет менее 10 мМЕ/л, таким лицам показана вакцинация против гепатита В, при уровне 10–100 мМЕ/л вакцинация должна быть отложена на один год, при уровне более 100 мМЕ/л вакцинация показана через 5–7 лет.
Общие антитела к ядерному антигену гепатита В состоят из иммуноглобулинов класса М и G. Определение общих антител к ядерному антигену гепатита В может использоваться только для ретроспективной диагностики гепатита В, так как у 5–10 % больных исследования на HBsAg дают отрицательный результат. Для того чтобы установить, в какой стадии развития находится гепатит В, необходимо дополнительное определение антител IgM. Антитела класса IgM — маркер активной репликации вируса, т.е. острой инфекции, а антитела класса IgG — перенесенной инфекции.
Антитела IgM к ядерному антигену гепатита В (анти-HBcAg IgM) в сыворотке
Анти-HBcAg IgM в сыворотке в норме отсутствуют. Анти-HBcAg IgM обнаруживаются уже в начале острой фазы болезни, еще до появления или в первые дни желтухи, иногда даже в конце инкубации. Выявление анти-HBcAg IgM расценивают как убедительный критерий диагностики гепатита В, особенно при отрицательных результатах исследования на HBsAg. Анти-HBcAg IgM циркулируют в крови больных в течение нескольких месяцев (2–5 месяца) до периода реконвалесценции, а затем исчезают, что рассматривается как признак очищения организма от вируса гепатита В.
Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса. Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяют только при обнаружении в крови HBeAg.
Наличие НВе-антигена свидетельствует о продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного. HBeAg-антиген — маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.
Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствуют. Появление АHTH-HBeAg-антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного. Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите, анти-HBeAg обнаруживаются в крови больного вместе с HBsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-HBeAg при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.
Гепатит С (ГС, hepatitis С) — вирусное заболевание, наиболее часто протекающее в виде посттрансфузионного гепатита с преобладанием безжелтушных и легких форм и склонное к хронизации процесса. Возбудитель — вирус гепатита С (ВГС) — имеет сходство с флавови-русами, содержит РНК.
Примерно 90% всех случаев посттрансфузионных гепатитов связаны с ВГС. Среди доноров антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС) обнаруживают в 0,2–5% случаев. У 40–75% пациентов регистрируется бессимптомная форма болезни, у 50–75% больных острым ВГС формируется хронический гепатит, у 20% из них развивается цирроз печени. Важная роль ВГС отводится и в этиологии гепатоклеточной карциномы.
Антитела к вирусу гепатита С в сыворотке
Антитела к вирусу гепатита С в сыворотке в норме отсутствуют. Диагностика гепатита С основана на обнаружении суммарных антител к ВГС методом ИФА, которые появляются в первые 2 нед заболевания и свидетельствуют о возможной инфицированности вирусом или перенесенной инфекции. Анти-ВГС-антитела могут сохраняться в крови реконвалесцентов на протяжении 8–10 лет с постепенным снижением их концентрации. Возможно позднее обнаружение антител спустя год и более после инфицирования.
При хроническом гепатите С, антитела определяются постоянно и в более высоких титрах. Существующие в настоящее время тест-системы для диагностики ВГС основаны на определении антител класса IgG, поэтому разрабатываются тест-системы нового поколения, которые позволят верифицировать активную инфекцию (определять антитела класса IgM). Антитела класса IgM могут выявляться не только при остром ВГС, но и при хроническом гепатите С. Снижение их уровня в процессе лечения больных хроническим гепатитом С может свидетельствовать об эффективности лекарственной терапии. Обнаружение антител к ВГС методом ИФА требует подтверждения способом иммуноблотинга для исключения ложно-положительного результата исследования.
Определение антител к вирусу гепатита С используют для диагностики острого и хронического гепатита С, персистирующего хронического гепатита. Вирус гепатита С может быть причиной развития цирроза и рака печени, поэтому данное исследование показано при этих заболеваниях.
Иммуноблотинг на антитела к белкам вируса гепатита С в сыворотке
Антитела к вирусу гепатита С в норме отсутствуют. Метод иммуноферментного анализа, применяемый для определения антител к ВГС, является скрининговым. В случае получения положительного результата для подтверждения его специфичности используют метод иммуноблотинга Western-blot — встречную преципитацию в геле антител в сыворотке крови больного с различными вирусными белками, подвергнутыми разделению по молекулярной массе с помощью электрофореза и нанесенными на нитроцеллюлозу. Исследование считается положительным, если выявляются антитела к белкам интенсивностью +1 к 2 или более антителам ВГС. Специфичными для ВГС являются антитела к белкам — Core, NS3-1, NS3-2, NS1, NS5.
Иммуноблотинг на вирус гепатита С служит подтверждающим тестом специфичности метода ИФА.
Вирусный гепатит D
Гепатит D — вирусная инфекция, протекающая вследствие биологических особенностей вируса исключительно в виде ко-или суперинфекции при гепатите В, характеризующаяся тяжелым течением часто с неблагоприятным исходом.
Возбудитель — вирус гепатита D (BГD) — по своим биологическим свойствам приближается к вироидам — обнаженным молекулам нуклеиновых кислот. Печень человека — единственное место репликации BГD. Известно существование двух вариантов инфекции: коинфекция (одновременное заражение ВГВ и BГD) и суперинфекция (заражение HBsAg-позитивных пациентов). Сочетание ВГВ и BГD сопровождается развитием более тяжелых форм патологического процесса, что определяется главным образом действием BГD. Летальность при суперинфекции достигает 5–20 %. Инфицирование дельта-вирусом может вызывать острое заболевание, заканчивающееся выздоровлением, или формировать хроническое носительство BГD.
При гепатите D могут отсутствовать в крови маркеры гепатита В — анти-НВс и HBs-антиген — и наблюдается угнетение ДНК-полимеразной активности, так как BГD ингибирует репликацию вируса гепатита В.
Антитела lgM к вирусу гепатита D в сыворотке
Антитела IgM к вирусу гепатита D в сыворотке в норме отсутствуют. Антитела BГD IgM (анти-BГD IgM) появляются в острый период «дельта-инфекции». По мере выздоровления при BГD происходит элиминация вируса из печени и исчезновение анти-BГD IgM. При хронизации процесса наблюдается персистирование BГD в ткани печени и анти-BГD IgM в высокой концентрации в крови. Антитела BГD IgM говорят об активной репликации вируса.
Антитела IgG к вирусу гепатита D в сыворотке
Антитела IgG к вирусу гепатита D в сыворотке в норме отсутствуют. Антитела BГD IgG (анти-BГD IgG) появляются в период реконвалесценции, и их концентрация постепенно снижается в течение нескольких месяцев. Определение антител BГD IgG может служить критерием ретроспективной диагностики гепатита ранее не уточненной этиологии.
Возбудителем вирусного гепатита Е (ВГЕ) является РНК-вирус. Для заболевания характерен фекально-оральный путь передачи, преимущественно водный. Инкубационный период болезни — около 35 сут. Клиническое течение острого ВГЕ сходно с ВГА. Существенно тяжелее заболевание протекает у беременных, особенно в III триместре.
Для специфической диагностики ВГЕ используются методы ИФА, основанные на выявлении антител класса IgM. Обнаружение в крови повышенного уровня анти-ВГЕ IgM служит лабораторным подтверждением диагноза.
ПЕРИОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ В КРОВИ МАРКЕРОВ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В ПРИ ОСТРОМ ПРОЦЕССЕ:
1) поверхностный HBs-антиген — с инкубационного периода до периода ранней реконвалесценции (5,5–6 мес);
2) антиген НЬе обнаруживается в инкубационный и продромальный периоды (до 3,5 мес); его выявление свидетельствует о репликации вируса;
3) антитела к Hbe-антигену появляются в острый период заболевания (3–4-й месяц) и сохраняются до нескольких лет;
4) антитела класса IgM к ядерному антигену (анти-HBc-IgM) обнаруживаются в продромальном периоде и сохраняются до периода реконвалесценции (со 2-го по 6-й месяц заболевания);
5) антитела класса IgG к ядерному антигену (анти-HBc-IgG) возникают в продромальном периоде и сохраняются на протяжении всей жизни (ведущий маркер вирусного гепатита В);
6) антитела к поверхностному Hbs-антигену (анти-HBs) появляются в стадии поздней реконвалесценции (6-й месяц) и сохраняются до 5 лет.