лимф мон интерференция что это
Расшифровка результатов клинического анализа крови
Клинический анализ крови — рутинный метод диагностики, который широко используется при обследовании больных, контроля лечения и в ходе скрининговых исследований. В рамках процедуры оцениваются количественные и качественные характеристики клеточных компонентов крови. На сегодняшний день в большинстве случаев анализ выполняют на специальных анализаторах, которые автоматически подсчитывают необходимые результаты и печатают их на бланках, используя англоязычные сокращения.
Эритроциты
Эритроциты, или красные кровяные тельца обеспечивают доставку кислорода ко всем клеточкам организма. В англоязычной литературе эритроциты называются “red blood cells”, откуда и происходит международное сокращение — RBC.
Для транспорта кислорода эти клетки содержат в себе гемоглобин, который умеет соединяться с ним при помощи химических реакций. Анализатор отражает следующие показатели, касающиеся этих процессов:
Эритроцитарные индексы
Помимо этого оцениваются, так называемые эритроцитарные индексы:
Все перечисленные показатели тесно связаны между собой и оцениваются в комплексе. Так например, кровотечение сопровождается потерей большого числа эритроцитов. Соответственно и общее содержание гемоглобина также снижается, но MCH может оставаться в норме. При таком заболевании, как железодефицитная анемия возникает небольшой дефицит эритроцитов при снижении гемоглобина и различных изменений в эритроцитарных индексах. Все возможные изменения в организме, связанные с содержанием эритроцитов перечислять не имеет смысла и врач расшифровывает результат, опираясь на знание тех процессов в организме, при различных заболеваниях.
Отдельным показателем, связанным с красными кровяными тельцами является скорость их оседания — СОЭ (в современных анализаторах — ESR). Это абсолютно неспецифический показатель, повышение которого говорит о каких-либо проблемах в организме, которые врачу нужно поискать. В ряде случаев, например при беременности, повышение СОЭ является физиологическим и считается вариантом нормы.
Лейкоциты
Лейкоциты — это большая группа разноплановых клеток, задача которых обеспечить защиту организма. В международной медицине часто фигурируют, как WBC — white blood cells (белые клетки крови). Именно этой аббревиатурой обозначается общее содержание лейкоцитов в бланке анализатора. Причиной повышения WBC служат различные повреждающие факторы: инфекции, травмы, ишемия и некроз тканей и другие. Проще говоря, повышение числа лейкоцитов говорит, что иммунная система активно включилась в борьбу с повреждением. В то же время низкие значения показателя могут говорить о недостаточности иммунитета под воздействием радиации, медицинских препаратов, некоторых вирусных инфекций, а также при заболеваниях, которые сопровождаются нарушениями образования или повышенным разрушением лейкоцитов.
Лейкоцитарные индексы
Помимо этого, в оценке содержания лейкоцитов используются лейкоцитарные индексы, или в старых бланках — лейкоцитарная формула. Общий клинический анализ с последней называется развернутым. Существуют несколько видов лейкоцитов, которые отличаются друг от друга по морфологии и функциональным особенностям. Лейкоцитарная формула отражает их процентное соотношение к общему числу, а в современных анализаторах выводится также абсолютное содержание каждого вида этих клеток. В бланке их можно распознать по следующим аббревиатурам:
Если после аббревиатуры стоит знак “%”, то речь идет о процентном, а знак “#” — об абсолютном их содержании. Изменения в лейкоцитарной формуле могут служить индикатором самых различных проблем в организме. Рассмотрим их подробнее.
Главной задачей нейтрофилов является фагоцитоз — поглощение чужеродных объектов и их разрушение. Они всегда устремляются к участкам воспаления и распада тканей, где и выполняют эту работу, поэтому повышенное их содержание свидетельствует об активном воспалении.
Помимо нейтрофилов функцию фагоцитоза выполняют макрофаги, в которые, в процессе своего развития, превращаются моноциты. Высокий уровень последних также служит маркером воспаления, обычно инфекционного характера.
Эозинофилы принимают участие в реакциях, связанных с аллергическим компонентом. Повышение их числа наблюдается при аллергозах, паразитарных инвазиях, некоторых инфекциях и онкологических заболеваниях.
Базофилы принимают участие в воспалении и аллергии, выделяя гепарин, гистамин и серотонин. Они крайне редко повышаются изолированно, хотя подобное явление при некоторых формах лейкоза несет тяжелое прогностическое значение.
Лимфоциты принимают активное участие в самых различных состояниях, включая иммунодефициты, аллергию, воспаление, аутоиммунные нарушения. Их высокое содержание может являться признаком детских инфекций, вирусных гепатитов, мононуклеоза, туберкулеза и целого ряда других заболеваний.
Оценка лейкоцитарных индексов, и лейкоцитарной формулы, требует понимания патологических и физиологических процессов в организме, и не должна проводиться только лишь на основании табличных данных. Категорически нельзя ставить себе диагноз, опираясь только лишь на результаты анализа.
Тромбоциты
Основная задача тромбоцитов — участие в остановке кровотечений. Они образуют первичную пробку в области повреждения сосуда и участвуют в формировании кровяного сгустка. В бланках автоматических анализаторов обозначаются аббревиатурой PLT, которая происходит от английского слова platelets (буквально, “блюдца”) за их своеобразную форму.
Снижение числа тромбоцитов может сопровождаться кровотечениями и является следствием таких заболеваний и состояний, как малярия, тромбоцитопеническая пурпура, злокачественные новообразования, ДВС-синдром и некоторых других.
Высокий уровень тромбоцитов может стать причиной чрезмерного тромбообразования и нередко не имеет видимых причин. В таком случае состояние обозначается, как эссенциальная тромбоцитемия. Помимо этого причиной тромбоцитоза могут выступать железодефицитная анемия, гемолиз, некоторые инфекционные и аутоиммунные заболевания, поражение костного мозга.
Работа с тромбоцитами в классическом анализе крови на этом исчерпывается, однако, автоматические анализаторы и в этом случае предлагают дополнительные диагностические возможности в виде следующих показателей:
Таблица нормальных показателей анализа крови
В заключении приводим таблицу основных нормальных показателей общего анализа крови у взрослых и детей. Напоминаем, что оценивать его результаты можно только в связке с данными осмотра, другими лабораторными данными, в том числе биохимическим анализом крови и инструментальными методами диагностики. Кроме того, референсные, то есть допустимые, значения зависят от типа и модели диагностического оборудования. При этом в бланке автоматического анализатора рядом с полученным результатом отражаются нормальные значения для конкретной модели.
Лимфоциты в крови
Агранулярные лейкоциты, агранулоциты, LYMPH, LYM, белые клетки крови
Лимфоциты – это группа белых клеток крови, которые отвечают за иммунный ответ организма. Они входят в число лейкоцитов – главных клеток нашего организма для борьбы с инфекциями.
Лейкоциты, или белые клетки крови, делятся на три группы:
Клетки-киллеры
Натуральные (естественные) киллеры (NK-клетки) – это важная составляющая иммунной системы. Функцией этих клеток является уничтожение опухолевых и зараженных вирусами клеток организма.
Опухолевые клетки образуются в организме человека каждый день, и именно нормальное функционирование NK-клеток нужно для того чтобы не развивались новообразования. Натуральные киллеры получили такое название, потому что сами находят и уничтожают поврежденные клетки.¹
Т-лимфоциты обеспечивают организму клеточный иммунный ответ. Это значит, что они составляют цепочку клеток, воздействующих на возбудителя болезни с целью его уничтожения. Т-лимфоциты бывают разными, к ним относятся:
Т-хелперы не способны уничтожать болезнетворные микроорганизмы, но без них функционирование клеточного иммунитета невозможно. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) поражает именно эти клетки. В результате длительного носительства ВИЧ при отсутствии лечения развивается синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). СПИД – это смертельно опасное заболевание, при котором иммунитет человека не работает и организм становится неспособным сопротивляться окружающим его бактериям, вирусам и грибкам. У больных СПИД наблюдаются тяжелые, сочетанные формы инфекций, которые часто не реагируют на терапию.
В то же время слишком сильная активность Т-хелперов также не является нормой. В таком случае они могут реагировать на нормальные клетки организма и приводить к их разрушению. Такие состояния называются аутоиммунными заболеваниями. Самыми распространенными из них являются аутоиммунный тиреоидит (болезнь Хашимото), сахарный диабет 1 типа, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, системная красная волчанка.
В-лимфоциты – это клетки, обеспечивающие гуморальный иммунный ответ. В таком виде ответа задействованы антитела. Этот иммунитет нужен организму для обезвреживания токсинов и патогенов, которые выделяют болезнетворные бактерии. Антитела способны связываться с патогенами или токсинами, нейтрализовать их и привлекать к ним тканевые макрофаги. Антитела распространены по всему организму, они находятся в крови, межклеточной жидкости, на слизистых оболочках.
В-лимфоциты бывают следующих видов:
Анализ крови на лимфоциты
Анализ крови на лимфоциты сдается в рамках расширенного общего анализа крови с лейкоцитарной формулой. В формуле прописывается абсолютное количество и относительное содержание всех видов белых кровяных клеток. Кровь можно сдавать из пальца или из вены.
В бланках анализов можно встретить разные обозначения лимфоцитов: LYMPH, LYM, LYM%. Единицей измерения является количество клеток на нанолитр крови, а также их процентное содержание среди всех лейкоцитов.
Показания к анализу
Общий анализ крови – это самый доступный метод диагностики различных заболеваний и состояний. Этот анализ показан для прохождения планового медицинского осмотра, перед госпитализацией, перед и после хирургического вмешательства, для диагностики болезней при первом обращении за медицинской помощью. Поэтому если пациент своевременно приходит к врачу, изменения содержания лимфоцитов в крови обнаруживаются быстро.
Заподозрить нарушения образования лимфоцитов и назначить анализ врач может в случае частых и/или длительных инфекционных заболеваний. Иногда эти болезни могут тяжело протекать, плохо поддаваться лечению и приводить к осложнениям.
Подготовка к анализу
Для того чтобы анализ крови показал точный результат, необходима правильная подготовка к нему:
| У детей | До 1 месяца | 1-6 мес | 6-12 мес | 1-6 лет | 7-12 лет | 13-15 лет |
| Абсолютное количество | 1,3-4,4 х 10⁹/л | 2,7-12,3 х 10⁹/л | 2,4-10,2 х 10⁹/л | 1,6-9,5 х 10⁹/л | 1,3-6,7 х 10⁹/л | 1,26-5,8 х 10⁹/л |
| Процентное содержание | 22-25% | 45-70% | 44-66% | 30-61% | 29-50% | 28-45% |
Лейкоцитарный перекрест
У детей существует состояние, которое называется лейкоцитарный перекрест. Ребенок рождается примерно с таким же соотношением нейтрофилов и лимфоцитов, что и взрослый человек: нейтрофилов 60-65%, лимфоцитов 16-34%. После рождения количество нейтрофилов постепенно снижаются, а лимфоцитов повышается. К пятому-шестому дню жизни их содержание уравнивается и составляет примерно по 45%. Это и есть перекрест лейкоцитарной формулы. Далее до 4-5 лет лимфоциты в анализе крови будут доминировать и составлять до 70% всех белых кровяных клеток. В возрасте 5-6 лет наступает второй перекрест: доля клеток снова уравнивается, после чего состав крови постепенно приближается к картине взрослого человека, когда нейтрофилов больше, чем других лейкоцитов.
Причины повышенных лимфоцитов
Повышение уровня лимфоцитов в крови называется лимфоцитоз. Лимфоцитоз может быть:
1. Абсолютным: когда повышено количество лимфоцитов в крови – более 4,8 х 10⁹/л у взрослых.
Причинами абсолютного лимфоцитоза могут являться:
Также лимфоцитоз может возникать во время менструации и в дни перед ней, после тяжелого физического труда, при сильных стрессах, после вакцинации.
2. Относительным: в случае повышения процентного содержания лимфоцитов среди других белых кровяных клеток. В таком случае их доля у взрослых составляет более 38%. При этом количество лимфоцитов может быть в пределах нормы, а их содержание – выше за счет снижения количества других лейкоцитов. Самыми многочисленными в лейкоцитарной формуле взрослых являются нейтрофилы, в норме их содержится 47-72%. Соответственно, при снижении их количества в крови может существенно возрастать доля лимфоцитов. И относительный лимфоцитоз будет первым, что бросится в глаза при получении результата анализа крови. К этому могут привести следующие состояния:
Причины пониженных лимфоцитов
Уменьшение числа лимфоцитов называется лимфопенией (лимфоцитопения). Лимфоцитов в крови становится менее 1 х 10⁹/л, или менее 17% в лейкоцитарной формуле. К лимфоцитопении могут приводить:
Последствия отклонения лимфоцитов от нормы
Снижение количества лимфоцитов в крови приводит к нарушению функции иммунной системы. При таком состоянии организм плохо сопротивляется вирусным инфекциям, человек может тяжело и длительно переносить различные заболевания.
Повышение лимфоцитов в крови говорит о наличии в организме инфекции, которая может никак не проявлять себя клинически.
Относительный лимфоцитоз указывает на нарушение образования других лейкоцитов, в том числе нейтрофилов. В таком случае человек будет тяжело переносить бактериальные инфекции.
Как уменьшить уровень лимфоцитов в крови
Чаще всего причиной высокого уровня лимфоцитов являются инфекции, иногда причиной может быть лейкемия. Поэтому в случае лимфоцитоза важно найти его причину и назначить лечение. Обычно применяются различные лекарственные средства: стероидные гормоны, иммунодепрессанты. Также могут использоваться пищевые добавки: эхинацея, рыбий жир.
Рисунок 3. Клетки крови у здорового человека и при лейкемии. Изображение: mikrostoker / Depositphotos
Как увеличить количество лимфоцитов в крови
В зависимости от состояния врач может назначить следующие методы лечения:
Если снижение лимфоцитов в крови – это побочный эффект приема какого-то лекарства (например, иммунодепрессанты и стероиды), врач может уменьшить его дозу или порекомендует прекратить прием.
Людям с низким уровнем лимфоцитов следует укреплять свою иммунную систему, придерживаясь богатой питательными веществами диеты, обеспечивающей достаточное количество белков, витаминов и минералов.³
Укрепить иммунитет помогут эти продукты:
Заключение
Лимфоциты – это важные клетки для человеческого организма, незаменимые для функционирования иммунной системы. Изменение уровня лимфоцитов может указывать на серьезные заболевания. Для того чтобы узнать свой уровень лимфоцитов, достаточно выполнить общий анализ крови.
Лимфоциты в крови
Лимфоциты – это один из компонентов белых кровяных телец, для их обнаружения используют общий анализ крови на лимфоциты. Они играют важную роль в формировании иммунных реакций. Их функция состоит в распознавании возбудителей болезней и мутировавших собственных клеток. После идентификации чужеродного объекта лимфоциты уничтожают его тем или иным путем: фагоцитоз, выработка специальных антигенов. Для уничтожения собственных клеток, переродившихся в раковые либо подвергшиеся другим изменениям лимфоциты подают особый химический сигнал, который заставляет такую клетку запустить процесс самоуничтожения. Помимо общего анализа крови на лимфоциты, в медицинском центре МедАрт проводят биохимический анализ крови.
Существует три разновидности этих клеток:
Образуются лимфоциты в красном костном мозге, их молодые, незрелые формы называются лимфобластами. Созревание идет в несколько стадий, происходит не только в костном мозге, но и в лимфоидных узлах, других органах лимфатической системы.
Появление повышенного количества лимфоцитов может служить маркером патологий костного мозга, развития опухолевых процессов в нем. Увеличение уровня лимфобластов также фиксируется при длительных инфекционных процессах. В этом случае это служит признаком истощения защитных сил организма. Иммунная система не успевает подготовить достаточное количество лимфоцитов к борьбе с возбудителем, это и становится причиной появления в крови большого количества лимфобластов.
Показания для проведения анализа
Общий анализ крови на лимфоциты назначают если есть подозрение на повышение либо уменьшение их количества. Анализ может назначаться по другим причинам, он позволяет получить много ценных данных о состоянии крови и всего организма. К основным показаниям относятся:
Подготовка к анализу
Анализ на лимфоциты входит в общий анализ крови, правила их проведения совпадают. То есть особой подготовки такое обследование не требует. Есть всего два условия которые нужно соблюдать:
Также не следует курить за 2-3 часа до проведения процедуры. Компоненты табачного дыма могут вызывать серьезные временные изменения в уровне белых кровяных клеток. Стоит избегать употребления алкоголя за 2-3 дня до взятия анализа так как алкоголь также может повлиять на достоверность полученных результатов.
Если не соблюсти эти требования, возможно ухудшение точности исследования, что приведет к получению врачом недостоверной информации и возможным ошибкам в диагностике либо повторному назначению обследования.
Метод исследования
Забор материала для анализа на лимфоциты осуществляется из вены при помощи обычного шприца либо специальной вакуумной системы. Традиционная техника взятия анализа при помощи обычного шприца на данный момент устарела и может приводить к следующим сложностям:
Кровь в него поступает за счет вакуума в пробирке, все параметры вакутейнера подбираются на этапе производства с целью сократить время для забора крови и обеспечить правильное соотношение количества реагента и крови.
Преимущества вакуумных систем:
Взять кровь для общего анализа можно из пальца, но в настоящий момент эта процедура используется значительно реже.
Нормы
Нормальный уровень лимфоцитов в крови зависит от возраста пациента. У детей количество лимфоцитов выше, со временем этот показатель постепенно снижается. На количество этих клеток влияет пол пациента, у женщин показатель относительно выше. Это связано с большей активностью и адаптивной способностью лимфатической системы женского организма.
| Возраст человека | Абсолютный содержание | Соотношение в % |
|---|---|---|
| У ребёнка младше года | 2-12 | 45-71 |
| У годовалого ребенка | 4-10 | 38-61 |
| 2-4 года | 3-9 | 34-50 |
| 4-10 лет | 1,6-6,7 | 31-51 |
| 10-18 лет | 1,3-5,3 | 31-43 |
| Старже 18 лет, взрослые люди | 1-4,9 | 20-40 |
| Онкориск женский: | 265 | 368 |
Лимфоциты повышены
Причиной того, что лимфоциты повышены часто выступают разнообразные вирусные инфекции. Такое повышение называется лимфоцитозом, чаще всего его регистрируют при заболеваниях, вызванных вирусами:
Количество лимфоцитов может расти при некоторых бактериальных инфекциях, например, сифилисе, коклюше или туберкулезе. К лимфоцитозу могут приводить заболевания, вызванные простейшими, например, малярия и токсоплазмоз. Нередко повышение лимфоцитов вызвано глистными инвазиями.
Лимфоциты могут быть повышаться по причинам, не связанным с инфекциями. К ним относятся:
К наиболее ярким признакам повышения числа лимфоцитов относятся:
Нужно учитывать, что лимфоцитоз не всегда проявляется через выраженные симптомы. Зачастую повышения уровня этих клеток обнаруживается случайно. Точно определить причину по которой произошло изменение формулы крови сможет только врач, для этого часто требуется проведение дополнительных тестов.
Чтобы устранить лимфоцитоз, нужно вылечить заболевание, которое привело к повышенной реакции иммунитета. Важно понимать, что кроветворная система отвечает на выздоровление с определенной задержкой. Даже после полного излечения лимфоцитоз может сохраняться до нескольких месяцев.
Лимфоциты понижены
Понижение лимфоцитов называется лимфопенией. Такое состояние характерно для следующих заболеваний:
В большинстве случаев снижение уровня лимфоцитов свидетельствует об истощении иммунной системы, когда организм по различным причинам не в состоянии поддерживать нужный уровень этих клеток в крови.
Лимфопения редко проявляется характерными симптомами. К наиболее частым признакам этого состояния относятся:
Как и в случае с лимфоцитозом, для нормализации уровня этих клеток нужно устранить причину, которая привела к патологическому состоянию. Нужно обратиться к врачу, который сможет установить точный диагноз и назначить правильную схему лечения.
В случае лимфопении беременных, при умеренном снижении уровня лимфоцитов особых мер принимать нет необходимости. Достаточно усиленного контроля за состоянием здоровья и регулярного прохождения всех нужных обследований. Если произошло резкое падение лимфоцитов – стоит обратиться за медицинской помощью для дополнительной диагностики.
Лимфоцитоз у детей
Особенностью детского возраста являются достаточно значительные изменения в формуле крови. Выделяют два так называемых перекреста, когда происходят резкие изменения соотношения клеток крови. Первый происходит в возрасте около недели после рождения, когда количество лимфоцитов начинает превышать количество остальных клеток крови. Второй перекрест происходит в 5-6 лет, когда количество лейкоцитов начинает преобладать над лимфоцитами.
Эти явления носят физиологический характер и являются проявлениями нормального развития иммунной, кроветворной систем. Но встречаются и патологические лимфоцитозы, которые свидетельствуют о развитии разнообразных болезней (в основном инфекционной природы).
Основной причиной повышения лимфоцитов в детском организме выше нормы являются инфекционные болезни, вызываемые различными вирусами. Чаще всего это заболевания, характерные для детского возраста – корь, краснуха, простудные инфекции. Может расти уровень лимфоцитов и по другим причинам:
Несмотря на то, что повышение лимфоцитов в детском организме далеко не всегда сопровождается характерными симптомами, существует ряд признаков свидетельствующих об этом. К ним относятся:
При проявлении таких симптомов нужно обратиться к педиатру и пройти рекомендуемые обследования. После постановки диагноза врач назначит соответствующее лечение, которое устранит причину активизации иммунной системы.
Нужно учитывать, что нормальный уровень лимфоцитов восстанавливается с запозданием. Даже после полного восстановления после инфекции либо других заболеваний пройдет от нескольких недель до 1-2 месяцев до нормализации уровня белых кровяных клеток. Это физиологический процесс, который не требует дополнительного лечения и не должен вызывать беспокойства.
Системы забора крови и интерференция в иммуноанализе
Авторы: Г. С. Власов, А.М. Пономарева, Д. Г. Полынцев, В. А. Головаченко, Д.В. Фадин
Источник: Клиническая лабораторная диагностика № 4, 2007, стр. 24-29.
Системы забора крови и интерференция в иммуноанализе
Для клинического иммунохимического анализа, как правило, используются образцы сыворотки, которые получают с помощью различных систем забора крови. Широкое распространение получили вакуумные и не вакуумные системы с активаторами свертывания и разделительными компонентами.
На рынке появилось большое количество одноразовых расходных материалов для забора крови, ускоряющих ее коагуляцию и оптимизирующих процесс отделения сыворотки от сгустка. [1, 2, 4,17, 27]. Наряду с известными производителями систем забора крови BectonDickinson, США; GreinerBioOneGmbH, Австрия; TerumoEuropeN.V., Бельгия; SarstedtAG&Co, Германия и др. предлагают свою продукцию более десяти новых компаний.
К сожалению, в инструкциях по применению, технических бюллетенях и даже в патентах не приводится необходимая информация о составе и свойствах всех добавок. Большинство компаний-производителей и дистрибьюторов умалчивают или не знают о возможных ошибках в иммуноанализе при использовании систем забора крови. Действующие международные стандарты, определяющие требования и методы контроля производства устройств для забора крови, не требуют испытаний влияния добавок на иммунохимический анализ [24, 32].
С другой стороны, производители анализаторов и наборов реагентов не имеют реальной возможности провести контроль влияния добавок на иммуноанализы, в связи с большим разнообразием вакуумных и не вакуумных систем забора крови.
Цель настоящего обзора: на основе доступной научной литературы рассмотреть механизмы влияния добавок на иммунохимический анализ и вопросы контроля и профилактики данного вида интерференции.
Физико-химические свойства добавок
Виды добавок в системах забора крови
а. активаторы свертывания крови:
— запуск коагуляционного каскада по внутреннему механизму (двуокись кремния или его производные);
— запуск коагуляционного каскада по внешнему механизму (тромбин);
б. иммобилизаторы активаторов свертывания;
в. поверхностно-активные вещества ( ПАВ или сурфактанты).
а. разделительные гранулы из полистирола;
— модификаторы поверхности гранул;
б. разделительные гели:
— полиэфирные гетерополимеры (олефиновый, силоксановый, акриловый);
Поверхность химически чистых стеклянных пробирок, обладая преимущественно гидрофильными свойствами, сама по себе активирует свертывание крови. В таких пробирках быстро образуется сгусток, который хорошо отделяется от стенок, в связи с низкой адгезией клеток и других компонентов крови. Для ускорения свертывания ряд компаний-производителей добавляют в стеклянные пробирки тромбин, запускающий коагуляционный каскад по внешнему механизму. Кроме этого, как вакуумные, так и не вакуумные стеклянные пробирки могут иметь разделительный гель или гранулы. Для уменьшения уровня гемолиза внутренняя поверхность стеклянных пробирок иногда обрабатывается поверхностно-активными веществами (ПАВ).
Пластмассовые пробирки обладают рядом преимуществ по сравнению со стеклянными: они дешевле, не бьются, имеют меньший вес, лучше подходят для автоматических систем обработки образцов крови и удобны при утилизации.
Очевидно, что к главному преимуществу пластмассовых пробирок следует отнести безопасность медперсонала при работе с кровью. Пробирки из полимеров не могут вызвать повреждений кожных покровов, устойчивы к механическим воздействиям, что существенно снижает риск заражения персонала лабораторий гемоконтактными инфекциями [17, 27].
При переходе на пластмассовые пробирки потребовалось использование дополнительных видов добавок. Преимущественно гидрофобная поверхность пластмассовых пробирок более медленно активирует свертывание крови, в большей степени адсорбирует клетки и другие компоненты образца. В результате сгусток крови хуже отделяется от стенки пробирки, чаще наблюдается гемолиз.
Для ускорения свертываемости крови используют диоксид кремния или его производные, которые равномерно наносят на внутреннюю поверхность пробирок вместе с водорастворимыми полимерами (поливинилпирролидон и др.). С целью снижения адгезии клеток крови добавляют ПАВ (ионогенные и неионогенные синтетические полимеры). С помощью распылительного устройства смеси соединений наносятся на внутреннюю поверхность пробирок и высушиваются.
Для облегчения получения сыворотки используют разделительные гранулы и гели, которые при центрифугировании свернувшейся крови образуют барьер между сывороткой и сгустком крови. Разделительные гранулы представляют собой частицы из полистирола, поверхность которых может быть модифицирована, в том числе ПАВ.
В качестве добавок, регулирующих удельный вес и вязкость гелей, в последнее время используют преимущественно органические соединения. Их перечень большой по количеству и по разнообразию структуры: первичные, вторичные, третичные и четвертичные амины с алифатическими радикалами от 8 до 24 атомов углерода; сополимеры полидиметилсилоксана с оксиалкиленом или полиоксиэтилена с монолауратом или с триизостеаратом; многоатомные спирты и амиды жирных кислот и т. д. В органической химии аналогов указанных соединений очень много, и все они могут быть использованы как гель-формирующие добавки.
Поэтому заявления некоторых компаний и дистрибьюторов о химической инертности добавок систем забора крови следует отнести к недобросовестной рекламе.
Интерференция в иммуноанализе
Учитывая, что большинство ведущих компаний постоянно вносят изменения в технологию производства систем для забора крови, а иммунохимические лаборатории переходят на новые поколения диагностических систем, в данном обзоре будет приведена доступная информация только за последние годы.
Установлено положительное или отрицательное смещение значений для гормонов, онкомаркеров и инфекционных маркеров на различных типах автоматических анализаторов. В таблице № 2 суммирована информация, опубликованная на сайте компании.
Компания производитель,
Вид анализа и результаты исследования
Номер технического бюллетеня
Abbott Diagnostics
AUZYME Monoclonal assay
Поверхностный антиген вируса
Увеличение уровня на 3-20%
Bayer Healthcare
Diagnostics Division
Общий Т4 полож. смещение, ср.- 18%
Фолат полож. смещение, ср.- 32%
CA27.29 полож. смещение, ср.- 19%
ФСГ отр. смещение, среднее значение – 26%
Beckman Coulter,Inc
Общий Т3 полож. смещение, >50%
Diagnostics Products
Corporation (DPC)
Во всех конкурентных типах иммунохимического анализа наблюдалось положительное смещение значений реакции. При определении фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) в двух диагностических системах с неконкурентным форматом анализа («сэндвич» метод), установлено снижение концентрации аналита (отрицательное смещение) по сравнению с контрольными пробами.
На первом этапе специалисты компании BDрекомендовали использовать стеклянные и пластмассовые пробирки для получения сыворотки без геля (BDVacutainer®serumtuber), а при интерпретации результатов учитывать другие лабораторные исследования и клиническое состояние пациента.
Кроме этого, было установлено, что при определении общего трийодтиронина (Т3об) на анализаторах Immulite ® наблюдается существенная разница в значениях при использовании образцов, полученных в стеклянных и пластмассовых пробирках без разделительного геля. Пробирки с активатором свертывания и гелем SST™ IIоказывали влияние на анализ Т3об, но не на тироксин при измерении на анализаторах BeckmanCoulter, Inc.
В июле 2005 года появилось краткое сообщение [11] о влиянии на иммуноанализ систем забора крови компании TerumoEuropeN.V. (Бельгия). На анализаторе Immulite®2000 образцы сывороток, полученные с помощью пробирок с активатором свертывания VenosafeSPи с активатором свертывания и гелем VenosafeSAS, вызывали положительное смещение при определении кортизола (+ 20%) и отрицательное смещение для лютеинизирующего гормона (- 20%) и ФСГ (- 7%).
Сравнительная оценка интерференции трех типов вакуумных пробирок: пластмассовых Vacuette® S. T.с активатором и гелем ( GreinerBio-OneGmbH, Австрия), стеклянных BDVacutainer® без добавок и пластмассовых BDVacutainer®SST™ cактиватором свертывания и гелем показала, что при измерении на анализаторе Immulite®2000 значение Т3об было выше с пробирками Vacutainer® SST™ ( 2,81 нмол/л), чем со стеклянными пробирками Vacutainer®(2,15 нмол/л) и с пластмассовыми пробирками Vacuette (2,24 нмол/л). Параллельные исследования, проведенные на анализаторе AxSYM (AbbottLab.), не выявили существенных различий [10].
Причины и механизмы интерференции
Хотя факт влияния различных добавок систем забора крови на иммунохимический анализ установлен, причины и механизмы данного типа интерференции остаются неясными и требуют дальнейшего изучения.
Существуют мнение, что главной причиной влияния на анализы добавок пробирок BDявляются ПАВ, относящиеся к классу неионогенных органоселиконов, торговая марка SilwetL-720. Согласно патенту они используются для покрытия внутренней поверхности пластмассовых пробирок, снижая адсорбцию клеток крови [11].
Полученные к настоящему времени данные свидетельствуют, что Silwet L-720 в концентрациях 0 до 400 мг/л не влияет на активность щелочной фосфатазы, субстрат и хемилюминесценцию в аналитической системе Immulite® (11). Это подтверждает наличие интерференции только с некоторыми видами тест-систем в исследованных до настоящего времени анализаторах с данным типом детекции иммунохимической реакции.
Добавление Silwet L-720 в сыворотку крови, полученную с помощью стеклянных пробирок, вызывало зависимое от дозы положительное смещение результатов анализа Т3об, когда измерение проводилось на Immulite®, но не на анализаторе AxSYM[11].
Есть несколько возможных объяснений установленных различий.
Во-первых, при постановке конкурентного анализа на Immulite® используется одностадийная реакция, в то время как в системе AxSYM- двухстадийная. Дополнительная отмывка в формате иммунной реакции AxSYM, возможно, более эффективно удаляет ПАВ и предотвращает его связывание с микрочастицами и/ или с антителами на поверхности микрочастиц. Во-вторых, время инкубации сыворотки с ПАВ микрочастиц, покрытых антителами, в AxSYMанализе меньше, чем инкубация в системе Immulite®. Возможно, что это приводит к уменьшению влияния ПАВ на микрочастицы и / или антитела на поверхности микрочастиц. В-третьих, различия в количестве и типе антител, используемых в тест-системах, могут вносить свой вклад в различия двух диагностических систем.
Прямые доказательства десорбции твердофазных антител при определении Т3об под влиянием Silwet L-720 установлены с помощью СДС-электрофореза сыворотки в полиакриламидном геле с последующим иммуноблотингом. Количественная оценка результатов исследований показала дозозависимую десорбцию мышиных IgG-антител против Т3 с поверхности полистироловых шариков [11].
С другой стороны, полидиметилсилоксаны с их липофильными свойствами могут присоединяться и индуцировать конформационные изменения в антителах независимо от типа твердой фазы (28).
В любом случае, в конкурентном анализе уменьшение количества или иммуноспецифической активности твердофазных антител приведет к снижению уровня связывания меченого аналита, что в свою очередь вызовет уменьшение сигнала и ложное увеличение концентрации аналита (положительное смещение). В неконкурентных пробах прямая зависимость уровня сигнала и концентрации аналита, поэтому будет наблюдаться снижение концентрации исследуемого соединения (отрицательное смещение).
Причина различной чувствительности к ПАВ тест-систем двух форматов, вероятно, связана с тем, что в неконкурентных пробах используют избыток твердофазных и детектируемых антител, поэтому они менее подвержены частичной десорбции с твердой фазы и/или возможной денатурации антител. Причина в различной степени интерференции при сходных концентрациях ПАВ в конкурентных пробах может быть связана с различиями в силе нековалентного связывания антител различных типов или твердых фаз, используемых в каждом виде пробы. Кроме этого, объем образца может значительно отличаться, изменяя конечную концентрацию ПАВ в различных тест-системах.
Показано прямое воздействие ПАВ на связывание авидина и биотина в радиоиммуноанализе, которое приводит к отрицательному смещению результатов анализа тиреотропина, пролактина и человеческого гонадотропина [35].
Не исключена возможность проникновения компонентов покрытия внутренней поверхности пробирок или геля в сыворотку и воздействия их на связь аналитов с сывороточными белками [18].
На степень интерференции влияют также продолжительность контакта крови с пробиркой, степень перемешивания, температура окружающей среды и условия транспортировки образцов [8, 9,12, 14, 18, 20, 24, 27].
Следовательно, влияние добавок, выделяющихся в образец сыворотки, на результаты иммуноанализа зависит от большого количества факторов и, вероятно, может иметь несколько точек приложения в различных диагностических системах. Очевидно, будут отличаться и пути решения данной проблемы.
В апреле 1999 в ответ на рекламации потребителей компания Roche Diagnostics начала выпуск нового набора на прогестерон (Elecsys Progesterone II), изменив технологию производства и состав реагентов для определения этого гормона [20].
В ноябре 2004 года компания BD выпустила новые пробирки с активатором свертывания и гелем (BD Vacutainer® SST™ II, adjusted tubes), уменьшив содержание сурфактанта Silwet L-720 в них. [11, 33]. Однако в опубликованных к настоящему времени работах получены неоднозначные данные. В одних исследованиях установлено, что сыворотки, собранные в модифицированные пробирки, не приводят к клинически значимой разнице в результатах анализов, хотя статистически достоверные различия установлены [10, 34]. В других погрешность измерения достигает 15 % по сравнению с контрольными пробами [19].
В начале 2005 года компания Terumo Europe N.V. начала производство новых пробирок, исключив полипропиленглюколь из состава добавок [ 11].
Так, Dasgupta A. c соавт. показали значительное снижение (от 5,9% до 64%) концентрации различных лекарственных средств при хранении образцов сыворотки в пробирках с гелем BD Vacutainer® SST™. Сорбция была подтверждена экстракцией лекарств из геля метанолом и зависимостью снижения концентрации аналита от объема сыворотки и длительности ее инкубации с гелем [15].
Очевидно, что разработка универсального разделительного геля практически не решаемая задача, в связи с исключительным разнообразием физико-химических свойств терапевтических средств. Совершенствование технологии производства приведет к созданию более стабильных гелей с улучшенными тиксотропными свойствами, но исключить возможность сорбции низкомолекулярных лекарственных средств в каждом конкретном случае могут только контрольные испытания. В связи с этим и оптимальная продолжительность хранения образца сыворотки в пробирке может быть определена для конкретного аналита только опытным путем.
Контроль и профилактика интерференции.
Прежде всего, сотрудники лабораторий должны хорошо знать причины и механизмы данного вида интерференции и проявлять повышенное внимание при смене лота, вида, типа или производителя систем забора крови. Общепринятый аналитический контроль качества с использованием контрольных сывороток в данном случае не может выявить ошибки исследований [25].
По этой причине в течение многих лет потребители пробирок BD, TerumoEuropeN.V. и, вероятно, рядадругих компаний-производителей не замечали систематической погрешности в исследовании ана-литов, когда проводили исследования на указанных диагностических системах. Не обнаружили значительную систематическую ошибку и органы государственной внешней оценки качества и многочисленные независимые программы внешнего контроля в странах, где указанные типы автоматических анализаторов широко распространены.
Клинические лаборатории, обслуживающие одно или несколько лечебных учреждений, имеют больше возможностей в контроле и профилактике интерференции это типа. Проблема может быть решена введением организационных мероприятий и дополнительных методов контроля, позволяющих выявить системную ошибку на преаналитическом этапе исследования. Одним из таких методов, который широко используется, но оказался в данном виде интерференции неэффективным, является метод контроля по «ежедневным средним» [5, 6]. Вероятно, при правильном подборе однородных групп пациентов, аналита с узким диапазоном концентраций и корректной оценке статистических данных, смещение результатов анализов было бы замечено.
Однако более результативным подходом к профилактике системной погрешности в небольших лечебно-профилактических учреждениях будет централизованная закупка лабораторией расходных материалов для забора крови одного лота, типа и производителя и оценка их в контрольных исследованиях.
Для этих целей можно использовать один из двух наиболее простых методов. Прямой, когда равный объем контрольной сыворотки помещается в тестируемую пробирку и проходит все этапы обработки вместе с пробирками, содержащими образцы. Контрольные сыворотки, предварительно заготовленные в лаборатории с известной концентрацией аналита, не должны быть контаминированы добавками пробирок. Сравнение результатов для контрольных сывороток, которые подвергались и не подвергались воздействию добавок, должно выявить неблагоприятное влияние добавок пробирок.
вторичную пробирку или лунку планшета добавляют равные объемы контрольной аттестованной сыворотки и опытной сыворотки, полученной с помощью тестируемых пробирок. Соответствие измеренной концентрации аналита, ожидаемой в пределах от 90 до 110%, будет свидетельствовать об отсутствии данного типа интерференции.
Такой подход в небольших лабораториях может обеспечить контроль интерференции в иммуноанализе, возникающей от смены систем забора крови в настоящее время.
В крупных диагностических центрах установить данный тип интерференции практически невозможно. Образцы для анализа поступают из различных больниц, поликлиник города или клинических лабораторий других регионов. В различных лечебных учреждениях могут использоваться различные типы и виды систем забора крови. По известным причинам будут отличаться и условия взятия, обработки и хранения образцов, а также время их доставки в диагностический центр.
Очевидно, в данном случае только производители систем для забора крови и диагностических наборов реагентов, зная источник и механизмы интерференции, могут за счет изменения технологии и введения дополнительных контрольных испытаний минимизировать интерференцию иммунохимического анализа в будущем.
Заключение и выводы
Необходимо отметить, что это проблема не только аналитических систем, перечисленных в таблице № 2. Впервые феномен влияния добавок систем забора крови на иммуноанализ подробно изучен на этих автоматических анализаторах в сочетании с некоторыми видами пробирок BD, в виду широкого их использования в лабораториях ряда стран. Возможность интерференции в иммуноанализе следует ожидать в других диагностических системах, особенно когда антитела иммобилизируются на твердофазном носителе методом сорбции и используется конкурентный формат реакции.
Компания BD совместно с производителями диагностических систем в течение года провела исследования причин интерференции, внесла изменения в технологию производства пробирок и организовала расширенные клинические испытания скорректированных по добавкам пробирок. Потребители наборов реагентов и систем забора крови на всех этапах решения данной проблемы получали необходимую информацию и рекомендации по профилактике интерференции.
В письме руководителям лабораторий были сформулированы общие принципы ретроспективной проверки недостоверных лабораторных исследований. Рекомендовано информировать врачей-клиницистов, и, если диагноз базировался исключительно на результатах лабораторных данных, провести повторное обследование пациентов.
Как будет решаться данная проблема другими производителями системы забора крови и диагностических наборов реагентов, прогнозировать очень трудно, так как многое зависит от объединения их усилий и от активности контролирующих государственных органов.
В ближайшие годы производители диагностических наборов и систем забора крови должны решить данную проблему интерференции и можно надеяться, что соответствующая информация будет приведена в инструкциях по применению изделий.
В настоящее время следующие рекомендации помогут специалистам клинических лабораторий избежать интерференции в иммуноанализе, вызванной добавками систем забора крови:
1. При введении в практику лаборатории новых видов вакуумных и невакуумных систем забора крови учитывать возможность интерференции в иммунохимическом анализе. В обязательном порядке получать необходимую информацию у производителей диагностических наборов. Если данный вид систем забора крови не прошел проверку с используемыми тест-системами, то с помощью дополнительных методов внутрилабораторного контроля качества оценить возможность ошибки исследований.
2. При введении в практику лаборатории нового иммунохимического анализатора или при постановке нового метода исследования необходимо иметь гарантию производителя на отсутствие интерференции в иммуноанализе данного аналита с конкретными системами забора крови. В противном случае необходимы контрольные испытания возможности интерференции в иммуноанализе, особенно при расхождении результатов лабораторных исследований и клинического состояния пациента.
Литература.