что такое посев мокроты на туберкулез

Пресс-центр

Вопрос-ответ: лабораторная диагностика туберкулеза

В Чувашской Республике проходит акция «Белая ромашка», посвященная Всемирному дню борьбы с туберкулезом, которая продлится до 20 апреля. О существовании этого недуга люди знали с древнейших времен. И в настоящее время туберкулез продолжает оставаться ведущей инфекционной болезнью, уносящей жизни людей во всем мире. Для

В распознавании и дифференциальной диагностике туберкулеза, а также в эффективности проводимого лечения очень важную роль играют лабораторные методы исследования. На наиболее распространенные вопросы о лабораторной диагностике туберкулеза отвечает заведующий бактериологической лабораторией Ольга Стебловская.

— Ольга Евгеньевна, расскажите, что такое МБТ?

— Где же находят эти туберкулёзные палочки?

Второе место по эффективности выделения МБТ у больных, не выделяющих мокроту, занимаю т исследования промывных вод бронхов.

— Как обнаруживают туберкулёзные палочки в лаборатории?

Частота обнаруж ения МБТ зависит от способа исследования биоматериала :

При бактериологическом способе исследования удается не только выявить туберкулезные палочки, но и подсчитать их количество, а также изучить лекарственную чувствительность к противотуберкулезным препаратам и составить схему лечения боль ного.

Бактериологический метод ( посев материала на специальные среды) обнаружения МБТ очень высокоточный, но имеет существенный недостаток: для получения культуры требуется 4-12 недель.

Применение жидких питательных сред и специального оборудования (бактериологических анализаторов) позволяет определить рост МБТ уже через 5дней.

В бактериологической лаборатории Республиканского противотуберкулезного диспансера представлен полный спектр методов для диагностики туберкулеза:

— бактериоскопические методы; кл ассический посев и определение л екарственной чувствительности МБТ на плотных средах;

— ускоренная методика на жидких средах с применением бактериологического анализатора BACTEC MGIT 960 ;

Источник

«Бактериологические исследования на туберкулез»

Бактериологические исследования на туберкулез
Бактериологический метод исследования патологического материала на микобактерии туберкулеза является более чувствительным, чем бактериоскопический. Надо, однако, иметь в виду, что в некоторых случаях под влиянием химиотерапии микобактерии туберкулеза могут не дать роста на питательных средах, в то время как при бактериоскопии они выявляются.
При бактериоскопии мазков из мокроты, окрашенных по Цилю — Нильсену, микобактерии могут быть найдены в тех случаях, если они содержатся в количестве около 500000 в I мл материала. Посев может дать положительный результат, если туберкулезные палочки содержатся в количестве нескольких десятков в I мл.
Для посева на микобактерии туберкулеза может быть использован любой материал, получаемый от больного (мокрота, моча, экссудаты, ликвор, промывные воды желудка, бронхов, мазки из гортани и т. д.), а также операционный и секционный материал. В большинстве случаев исследуемый материал, кроме туберкулезных микобактерий, содержит разнообразную постороннюю флору, которая на питательных средах растет гораздо быстрее туберкулезных микобактерий и препятствует росту микобактерий. Поэтому перед посевом материал подлежит специальной обработке.
Чаще всего в лаборатории приходится иметь дело с мокротой. При отсутствии у больного мокроты обычно исследуют промывные воды желудка В последнее время считается, что промывные воды бронхов дают больший процент положительных посевов, чем мокрота. Результаты посева мазков из гортани на тампоне, по литературным данным, уступают по количеству положительных ответов посеву мокроты, но он прост по технике взятия материала.
ОБРАБОТКА И ПОСЕВ МОКРОТЫ. Для посева мокроту собирают в стерильную баночку или плевательницу. Перед посевом больной должен прополоскать рот и зев кипяченой водой. Для исследования лучше брать первую утреннюю порцию мокроты до утреннего приема лекарств. Для освобождения мокроты от вторичной флоры при посеве применяют обработку серной кислотой по методу Гона или Мазура. Оригинальные методы, предложенные в свое время этими авторами, в последнее время были значительно видоизменены. Изменение методов обработки материала в основном сводится к снижению концентрации кислоты, применяемой для обработки, т. е. к выбору более щадящих методов микобактерий туберкулеза. Это связано со значительным изменением свойств микобактерий в результате интенсивной химиотерапии.
Метод Гона. После того как из мокроты обычным способом был приготовлен мазок, мокроту переливают в толстостенную банку с бусами или битым стеклом и гомогенизируют. Гомогенизацию производят энергичным встряхиванием банки в руках или в шютель-аппарате. Гомогенизированную мокроту заливают равным количеством 3—5% серной кислоты и тщательно встряхивают до полного смешивания мокроты с кислотой. Затем, когда мокрота превращается в гомогенную массу, ее переливают в центрифужные пробирки и центрифугируют Обработка мокроты кислотой должна продолжаться 20 минут, из них 10 минут занимает центрифугирование. После окончания центрифугирования надосадочную жидкость сливают в дезинфекционный раствор и осадок засевают на 3—4 пробирки с яичной средой (Гельберга, Петраньяни или Левенштейна — Иенсена). Засев производят петлей (из толстой платиновой проволоки с несколькими оборотами) или пастеровской пипеткой.
Метод Мазура позволяет обходиться без центрифугирования. Гнойные комочки мокроты вносят в широкую пробирку, содержащую 3 мл 2% серной кислоты и энергично встряхивают в течение 3 минут. Туберкулезные микобактерии захватываются образующейся пеной, которую и засевают платиновой петлей. В последние годы для обработки мокроты пользуются комбинацией обоих методов, предложенной Гельбергом. Метод заключается в том, что после посева пены материал центрифугируется и засевается осадок.
Кроме серной кислоты, для освобождения мокроты от вторичной флоры пользуются 2—5% раствором едкого натра с последующей нейтрализацией 4—5% раствором соляной кислоты. Обработка происходит при температуре термостата в течение 30 минут— 1 часа. Для обработки материала с успехом пользуются 10% раствором трехзамещенного фосфорнокислого натрия. Этот раствор хорошо гомогенизирует мокроту и освобождает ее от присутствия вторичной флоры. Хорошо гомогенизированную мокроту заливают двойным количеством этого раствора, хорошо смешивают и оставляют на сутки при температуре термостата. На следующий день весь материал центрифугируют и осадок засевают пипеткой на яичные среды.
ПОСЕВ ЛИКВОРА, МОЧИ, ЭКССУДАТА, ПРОМЫВНЫХ ВОД ЖЕЛУДКА И БРОНХОВ. Всякий жидкий материал, поступающий в лабораторию для посева, сначала необходимо центрифугировать. Если материал не содержит вторичной флоры (ликвор, серозный экссудат), то осадок или нижний слой жидкости в случае отсутствия осадка засевают без обработки на яичные среды. При посеве гнойного экссудата, мочи, промывных вод желудка или бронхов осадок после центрифугирования обрабатывают 3% серной кислотой в течение 20 минут, включая повторное центрифугирование, и после удаления надосадочной жидкости засевают на яичные среды.
Промывные воды желудка необходимо сеять как можно быстрее после их получения, так как жизнеспособность микобактерий в промывных водах под влиянием желудочного сока со временем снижается. Для исследования в лабораторию доставляется все полученное количество промывной жидкости.
ПОСЕВ МАЗКА ИЗ ГОРТАНИ. Микобактерии туберкулеза можно обнаружить в слизи из гортани. Больному предлагают покашлять и под контролем гортанного зеркала ватным тампоном снимают слизь с надгортанника. Тампон, снятый с зонда, помещают в ступку с 3—5% серной кислотой, тщательно отжимают, тампон удаляют, жидкость центрифугируют и осадок засевают на яичные среды. Обработку можно производить и следующим образом тампон осторожно опускают в пробирку с серной кислотой на 20 минут, также осторожно переносят его из пробирки с кислотой в пробирку со стерильным физиологическим раствором на несколько минут, а затем делают посев, втирая тампон в поверхность твердой среды.
Таким же образом делают посев всякого материала, взятого на тампоне; гноя, мазков из ран и т. д.
ПОСЕВ КРОВИ. Кровь берут из вены около 5 мл в пробирку со стерильным раствором лимоннокислого натрия. После центрифугирования осадок гемолизируют стерильной дистиллированной водой, центрифугируют, осадок обрабатывают 3% серной кислотой и после повторного центрифугирования засевают на питательные среды.
УСКОРЕННЫЕ МЕТОДЫ ПОСЕВОВ. Туберкулезные микобактерии на питательных средах растут довольно медленно, значительно медленнее, чем другие патогенные микроорганизмы. Предложены ускоренные методы посевов. Однако надо иметь в виду, что, несмотря на рост в более короткие сроки, эти методы дают все же значительно меньший процент положительных результатов. Поэтому при применении ускоренных методов рекомендуется делать параллельно посев на плотные яичные среды и в случае отсутствия роста при посеве ускоренным методом ждать результатов посева на яичных средах.
Метод Прайса. Из гнойных комочков мокроты делают мазки на стерильных предметных стеклах. Мазки подсушивают, обрабатывают 5% серной кислотой путем погружения мазков в кислоту на 5 минут, затем дважды промывают в стерильной дистиллированной воде и погружают в пробирки с кровяной средой (1 часть крови+3 части воды). Через 7—10 дней стекла извлекают из пробирок, отмывают от крови, сушат, фиксируют и после окраски по Цилю — Нильсену микроскопируют. При микроскопировании в случае роста видны типичные микроколонии палочек в виде «кос» и «жгутов».
Метод Школьниковой — метод глубинного посева на кровяную среду. Материал обрабатывают как обычно. Перед посевом осадок дважды отмывают при центрифугировании стерильной дистиллированной водой. Через 10—20—30 дней делают мазки из отцентрифугированного и отмытого осадка. Этот метод более чувствителен и дает больше положительных результатов, чем метод Прайса. Количество положительных результатов повышается при высевах с кровяной среды на яичную.
Туберкулезные микобактерии растут медленно, поэтому пробирки нужно выдерживать в термостате (при температуре 37—38°) в течение 2—3 месяцев, если рост не появляется раньше, и только после этого срока может быть дан отрицательный ответ. При появлении роста делают мазки из выросшей культуры, окрашивают по Цилю — Нильсену и микроскопируют. Если культура вырастает в обычные сроки, имеет типичные культуральные и морфологические признаки, то дается положительный ответ. При появлении роста в более ранние сроки в случае обнаружения каких-либо особенностей в культуральных и морфологических свойствах (пигментированная культура, нетипичный рост) культура подлежит дальнейшему изучению.
БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА.
При отрицательных результатах бактериоскопии и посева материала, исследуемого на микобактерии туберкулеза, если все же подозревается туберкулез, прибегают к опытам на животных (биологическая проба) как наиболее чувствительному методу выявления возбудителя туберкулеза. Диагностическим лабораторным животным является морская свинка. Этот метод дает возможность определить в патологическом материале жизнеспособных и вирулентных микобактерий. Надо учесть, однако, что микобактерии туберкулеза, устойчивые к препаратам гидразидов изоникотиновой кислоты (фтивазид и др.), вследствие снижения или потери вирулентности могут не вызвать туберкулеза у свинки.
Патологический материал для заражения животных собирают и обрабатывают так же, как и для посева, но здесь, кроме того, требуется тщательное отмывание осадка от следов серной кислоты (дважды физиологическим раствором с последующим центрифугированием), чтобы нейтрализовать вредное действие кислоты на животное. После нового добавления к осадку физиологического раствора полученную эмульсию вводят в количестве 0,5—2 мл морской свинке подкожно в правую паховую область. Зараженных животных помещают в отдельные клетки (при заражении одним и тем же материалом двух и больше животных их можно поместить в общую клетку, если позволяют размеры последней) и подвергают их систематическому наблюдению, обращая внимание на вес, изменения на месте введения материала и регионарных лимфатических узлов, а также общее состояние животного. Если животное не погибает от патологического процесса, то его забивают через 3—5 месяцев. Секционный материал от животного подвергают тщательному патологоанатомическому исследованию на туберкулез, если нужно, гистологическому и бактериологическому. Для ускорения диагностики туберкулеза у подкожно зараженной морской свинки можно, не ожидая гибели или забоя животного, произвести бактериоскопию на микобактерии туберкулеза содержимого регионарных к месту заражения лимфатических узлов или инфильтратов на месте инъекции.

Автор: Сейтимова Молдир

Областной противотуберкулезный диспансер

Источник

Лабораторная диагностика туберкулеза

Патология проявляется длительным кашлем, субфебрильной температурой, которая может удерживаться в течении нескольких месяцев, ночным потоотделением, лимфаденопатией. Современные схемы лечения позволяют избавиться от болезни. Однако, для этого необходима своевременная постановка диагноза. Первое время туберкулез может не вызывать клиническую симптоматику, поэтому диагностика должна быть профилактической и регулярной. Ранняя терапия позволяет избавиться от осложнений, среди которых выраженные структурные нарушения дыхательной системы и вторичное распространение инфекции.

Современные методы диагностики туберкулеза

Различают следующие методы диагностики патологии:

бактериологический анализ мочи;

биохимическое исследование крови;

микробиологические методы диагностики;

исследование свертывающей системы;

микроскопический анализ мокроты;

лучевые методы диагностики.

Рассмотрим эти методы подробнее.

Бактериологический анализ мочи

Показан при внелегочной форме туберкулеза. Этот метод диагностики крайне важен, ведь туберкулез мочеполовой системы часто вызывает осложнения и долгое время не вызывает симптомов. Именно туберкулез может долго маскироваться под воспалительный процесс или мочекаменную болезнь. Поэтому, длительная патология данных органов, которая сложно поддается лечению, является показанием к диагностике. Также, анализ мочи показан при туберкулезе для исключения вовлечения в процесс мочеполовой системы.

Для того, чтобы определить наличие возбудителя в моче, проводится бактериоскопия или посев на среду.

Для обнаружения микобактерии проводится специальное окрашивание, при котором возбудитель приобретает другой оттенок, отличный от здоровых клеток.

Другой метод заключается в посеве образца мочи на питательную среду. Если наблюдается рост культуры микобактерий, это говорит о наличии в организме возбудителя.

В общем анализе мочи наблюдаются характерные изменения при туберкулезе. Это появление капель гноя, наличие или следы белка и более кислая реакция. Также появляются видоизмененные лейкоциты, бактерии, эритроциты.

Биохимический анализ крови

На некоторых стадиях болезни выявляются изменения в биохимическом исследовании крови. При неактивной форме никаких изменений в данных анализах нет, хотя они могут появляться при сопутствующей патологии.

Острая форма туберкулеза приводит к снижению альбумино-глобулинового коэффициента. Если патология привела к осложнениям в виде поражения печени, повышается уровень трансаминаз, разных фракций билирубина. Эти показатели входят в обязательное обследование пациента с туберкулезом. Пациент сдает этот анализ в динамике, для оценки состояния.

Ухудшение работы почек может отражаться в повышении креатинина, изменениях скорости клубочковой фильтрации.

Биохимический анализ крови не имеет специфической диагностической ценности, однако является важным компонентом оценки качества лечения и состояния пациента.

К иммунологическим методам диагностики относится методика T-SPOT.TB. Основа способа заключается в изучении реакции Т-лимфоцитов. Процедура имеет высокую чувствительность и довольно информативен. Ложные результаты исключены даже тогда, когда остальные методики нечувствительны к результату. Метод применяется в сомнительных случаях, например после прививок, у пациентов с аутоиммунной патологией, у медработников. Данный способ позволяет оценить наличие возбудителя количественно, но не дает информации о фазе процесса.

Особое место данная диагностика занимает у носителей ВИЧ. Дело в том, что вирус поражает именно лимфоциты. Несмотря на это диагностика по методу T-SPOT.TB дает точные результаты.

Высокая точность теста объясняется также тем, что тест-система чувствительна к компонентам возбудителя, но именно к тем, которых нет ни в вакцине БЦЖ, ни в других микроорганизмах, которые имеют сходные компоненты. Суть метода заключается в количественном определении в крови эффекторных Т-клеток (CD4 и CD8), вырабатывающих ИФН-ɣ (гамма-интерферон), который продуцируется в ответ на стимуляцию специально подобранными антигенами ESAT-6 и CFP10. Речь идет об одном из фрагментов генома микобактерии. Примечательно, что высокая специфичность наблюдается и в латентную, и в активную фазу.

Микробиологические методы диагностики

Применяются для прямого обнаружения возбудителя туберкулеза в биологических тканях организма. Применяются различные методики.

Окраска по Цилю-Нельсену заключается в том, что мазок с препаратом обрабатывается специфическим красителем. Микобактерии приобретают характерный оттенок, что говорит о том, что реакция произошла. Так можно подтвердить или исключить наличие возбудителя в материале. Метод экономичный и сравнительно быстрый. Однако, он чувствителен только при высокой концентрации микроорганизмов в образце.

Полимеразно-цепная реакция позволяет осуществить воспроизведение ДНК бактерии из её фрагментов, которые содержатся в тканях. Это быстрый и информативный метод диагностики, который имеет высокую специфичность и чувствительность.

Культуральный метод заключается в выращивании культуры из микобактерий. Для этого берется фрагмент биоматериала и сеется на питательную среду. Потом оценивается штамм, который вырос на среде и подтверждается или исключается диагноз. Используется специфическая среда, на которой с большей вероятностью вырастет необходимая среда. Выращенные колонии можно использовать для определения чувствительности к антибиотикам.

Исследование свертывающей системы крови

Коагулограмма часто используется в фтизиатрии, так как у пациентов с туберкулезом постепенно возникает кровохаркание или легочные кровотечения. Это приводит к изменению показателей гемостаза. Анализ может меняться и после хирургического лечения болезни.

Микроскопический анализ мокроты

Проводится также бактериология мокроты. Применяется специфический метод окраски, который позволяет определить наличие микобактерии. Посевы на питательные среды также имеют диагностическую ценность.

Бактериоскопия мокроты подразумевает её изучение под необходимым увеличением микроскопа. При высокой концентрации микроорганизмов методика довольно специфична и чувствительна. Мокрота изучается 3 раза для того, чтобы получить наиболее точный результат.

Лучевые методы диагностики

Флюорография используется для скрининговой диагностики, которая требует подтверждения при подозрительных результатах. Неспецифический метод, который используется для профилактического осмотра. Цифровая методика позволяет оценивать изображение на экране с использованием увеличения и приближения картинки. Метод прост, быстрый и экономичный.

Рентгенография является более точной методикой и позволяет полноценно обследовать структуры грудной клетки. на снимке можно обнаружить признаки функциональной недостаточности различных органов, проследить топография новообразования, диагностировать каверну, ателектаз, абсцесс или нарушение целостности плевральной полости. Выполняется в двух проекциях для более точных результатов. Иногда используется прицельное проведение диагностики.

Томография является наиболее точной методикой визуализации структур грудной клетки. Это формирование послойных изображений органов и структур. Можно определить распространение и локализацию очага болезни, увидеть, какие ткани он поразил и насколько глубоко проник.

Методики с использованием контраста применяются для получения изображения бронхиального дерева (бронхография). Можно обнаружить полостные изменения, нарушения дренажной функции, структурные изменения и наличие фистул. также применяется ангиопульмонография. контраст вводится в сосудистое русло и позволяет оценить легочной кровоток. особенно это важно при кровохарканьи и кровотечениях.

Применяются радионуклидные методы, сцинтиграфия. Они применяются для оценки функциональной активности или нарушений.

Ультразвуковая методика применяется для оценки деятельности сердца, диагностики состояния плевральных синусов, лимфатических узлов.

Сбор материала и подготовка к исследованиям

Для анализа мочи на туберкулез применяется утренняя порция. необходимо провести туалет наружных половых органов и не касаться ими резервуара для сбора материала. Контейнер должен быть стерильным и сухим. Собранный биоматериал необходимо как можно скорее доставить в лабораторию, не допускать его высыхания и нагревания. За сутки до сдачи анализа необходимо отказаться от таких продуктов, как черника, морковь, свекла и других ярких овощей и фруктов. Также следует ограничить прием диуретиков, витаминов, ацетилсалициловой кислоты. Женщинам следует помнить, что анализы мочи не сдают во время менструаций. Сдается средняя, промежуточная порция мочи.

Мокрота собирается натощак, с соблюдением основных правил. Материал необходимо откашлять, чтобы в посуду не попала слизь изо рта или носоглотки. Используется специальная плевательница из темного стекла, с плотной крышкой. Мокрота не должна обветриваться или высыхать.

Нормы и выявляемые отклонения

В норме, в организме не должно быть микобактерий. Их наличие расценивается как положительный результат диагностики туберкулеза. Негативный результат говорит о том, что у пациента нет данной патологии. Некоторые методы неспецифичны и не обладают высокой диагностической ценностью. Они используются для оценки общего состояния. Бактериологические методики более специфичны и их положительные результаты можно считать подтверждением диагноза. Отрицательный результат является поводом для повторных анализов, если есть клинические признаки болезни.

Сроки готовности результатов диагностики туберкулеза

Общий и биохимический анализ крови, мокроты и мочи может быть готов в течении нескольких часов. Как правило, результаты сообщаются на следующий день.

Бактериологический метод с окраской занимает около 24 часов.

Результат лучевых методов диагностики зависит от скорости описания снимка. Чаще всего, это занимает около суток.

Лаборатория АО «СЗЦДМ» предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента

Диагностика В медицинских центрах АО «СЗЦДМ» проводят качественные диагностические исследования всего организма

Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.

Источник