что такое оп сыворотки и оп критическая
Маркеры гепатита В (HBeAg, anti-HBcoreM, anti-HBe, Anti-HBcore)
Гепатит В – острое или хроническое заболевание печени, вызываемое вирусом гепатита В (HBV), протекающее в различных клинических вариантах: от бессимптомных форм до злокачественных (цирроз печени, гепатоцеллюлярная карцинома). На долю ГВ приходится около 15% всех регистрируемых в РФ острых гепатитов и не менее 50% хронических.
Схематично строение вирусной частицы гепатита В можно изобразить так:
Рис.1. Структура вируса гепатита В.
Белок внешней оболочки ВГВ является его поверхностным антигеном – HBsAg. HBsAg – это основной маркёр ГВ. При остром гепатите HBsAg может быть выявлен в крови обследуемых уже в инкубационный период в первые 4–6 недель от начала клинического периода. Присутствие HBsAg более 6 мес рассматривается как фактор перехода болезни в хроническую стадию.
Следует отметить, что только часть HBsAg, образующегося при размножении вируса, используется для построения новых вирусных частиц, основное же его количество поступает в кровь инфицированных лиц, где и определяется HBsAg- антиген.
Это четвертый маркер активной репликации вируса наряду с ДНК, HBs Ag и антиHBc –IgM.
Исчезновение HBeAg и быстрое нарастание титра анти-HBе у больного практически исключает угрозу хронизации ГВ. Отсутствие такой динамики и выявление монотонно низких концентраций анти-НВе, наоборот, может свидетельствовать о развитии хронического ГВ с невысокой активностью (HBeAg-негативный хронический ГВ).
анти-HBs определяют для оценки течения инфекционного процесса и благоприятности его исхода. Факт появления анти-HBs рассматривается как надежный критерий развития постинфекционного иммунитета, т.е. выздоровления после гепатита В. Хотя при хроническом гепатите В HBsAg и анти-HBs могут иногда обнаруживаются одновременно.
Период, в который отсутствуют и HBsAg, и анти-HBs, называется фазой серологического «окна». Сроки появления анти-HBs зависят от особенностей иммунологического статуса больного. Продолжительность фазы «окна» чаще составляет 3–4 мес. с колебаниями до года.
Анти-HBs могут сохраняться пожизненно. Анти-HBs обладают протективными (защитными) свойствами. Этот факт лежит в основе вакцинопрофилактики. В настоящее время в качестве вакцины против ГВ, в основном, применяют препараты рекомбинантного HBsAg. Эффективность иммунизации оценивают по концентрации антител к HBsAg у вакцинированных лиц. Согласно данным ВОЗ, общепринятым критерием успешной вакцинации считается концентрация антител, превышающая 10 мМЕ/мл.
При интегративной фазе развития (т.е. когда вирусные частицы не подвергаются дальнейшей репликации) геном HBV встраивается в геном гепатоцита. Основную роль играет фрагмент, несущий ген, кодирующий HBs антиген Поэтому при этой фазе идет преимущественное образование HBs Ag и антител к коровскому белку и анти- HBe Ag.
Рис. 2. Динамика серологических маркёров при остром гепатите В.
Расшифровка результатов теста на антитела к коронавирусу – таблица
Что такое антитела к коронавирусу?
Антитела (другое название – иммуноглобулины) – это специальные белки, которые вырабатываются и (или) продуцируются плазматическими клетками.
Что делают иммуноглобулины?
Иммуноглобулины образуются в ответ на попадание в организм чужеродных бактерий или вирусов. Они взаимодействуют с антигеном (специфическим участком вредителя) и обезвреживают его.
Таким образом наш иммунитет стоит на страже нашего здоровья.
Какие классы иммуноглобулинов существует?
Выделяют 5 классов иммуноглобулинов, некоторые из которых содержат подклассы.
IgA – секретируются на поверхности эпителия и присутствуют в слюне, слезе, на поверхности слизистых.
IgM – обнаруживается при первичном попадании антигена. Указывает на острый инфекционный процесс у человека.
IgG – основной класс иммуноглобулинов, защищающий от вирусов, бактерий, токсинов.
IgD – обнаруживают на поверхности развивающихся B-лимфоцитов. Функция не установлена.
IgE – секретируются при аллергической реакции немедленного типа.
Методы определения антител к коронавирусу
Существуют два метода определения иммуноглобулинов к коронавирусу в организме человека – ИФА и ИХА.
Иммуннохроматографический анализ – это качественный метод определения иммуноглобулинов классов М и G.
Качественный метод – это метод, позволяющий только определить наличие антител в организме. Иными словами, ответить на вопрос – есть они или нет.
Иммуноферментный анализ – это количественный метод определения иммуноглобулинов.
Количественный метол – не просто говорит о наличии антител, но и показывает их количество в единице объема крови.
Для анализов проводят забор венозной крови, следовательно, подготовка к процедуре стандартная:
Проводить исследование на пустой желудок (не есть за 8 часов до процедуры).
Воздержаться от питья воды за час до забора крови.
Для курильщиков – не курить за 2 часа до процедуры.
Что выбрать – качественный или полуколичественный анализ?
Для чего проводится качественный и количественный анализ?
Качественный анализ позволяет ответ на 2 вопроса:
Полуколичественный тест позволяет ответить на эти вопросы, а также определить количество иммуноглобулинов в организме.
Для чего определять количество иммуноглобулинов?
Определение количества антител позволяет определить, сформирован ли долговременный иммунитет. Именно он защищает на организм от повторного заболевания коронавирусом.
Показания к проведению исследования
Показаниями к проведению анализа является:
Наличие симптомов общего недомогания. В этом случае тестирование проводится для подтверждения диагноза.
При контакте с носителем или больным коронавирусной инфекцией.
По желанию – для лабораторной оценке иммунного статуса.
Как проводится тест
Необходимо прийти в Клинику МЕДЕЛ по предварительной записи.
Процедура проводится путем забора крови.
В Клинике МЕДЕЛ результаты изготавливаются в течение 1 дня.
Расшифровка результатов теста на антитела к коронавирусу – таблица
Что такое антитела к коронавирусу?
Антитела (другое название – иммуноглобулины) – это специальные белки, которые вырабатываются и (или) продуцируются плазматическими клетками.
Что делают иммуноглобулины?
Иммуноглобулины образуются в ответ на попадание в организм чужеродных бактерий или вирусов. Они взаимодействуют с антигеном (специфическим участком вредителя) и обезвреживают его.
Таким образом наш иммунитет стоит на страже нашего здоровья.
Какие классы иммуноглобулинов существует?
Выделяют 5 классов иммуноглобулинов, некоторые из которых содержат подклассы.
IgA – секретируются на поверхности эпителия и присутствуют в слюне, слезе, на поверхности слизистых.
IgM – обнаруживается при первичном попадании антигена. Указывает на острый инфекционный процесс у человека.
IgG – основной класс иммуноглобулинов, защищающий от вирусов, бактерий, токсинов.
IgD – обнаруживают на поверхности развивающихся B-лимфоцитов. Функция не установлена.
IgE – секретируются при аллергической реакции немедленного типа.
Методы определения антител к коронавирусу
Существуют два метода определения иммуноглобулинов к коронавирусу в организме человека – ИФА и ИХА.
Иммуннохроматографический анализ – это качественный метод определения иммуноглобулинов классов М и G.
Качественный метод – это метод, позволяющий только определить наличие антител в организме. Иными словами, ответить на вопрос – есть они или нет.
Иммуноферментный анализ – это количественный метод определения иммуноглобулинов.
Количественный метол – не просто говорит о наличии антител, но и показывает их количество в единице объема крови.
Для анализов проводят забор венозной крови, следовательно, подготовка к процедуре стандартная:
Проводить исследование на пустой желудок (не есть за 8 часов до процедуры).
Воздержаться от питья воды за час до забора крови.
Для курильщиков – не курить за 2 часа до процедуры.
Что выбрать – качественный или полуколичественный анализ?
Для чего проводится качественный и количественный анализ?
Качественный анализ позволяет ответ на 2 вопроса:
Полуколичественный тест позволяет ответить на эти вопросы, а также определить количество иммуноглобулинов в организме.
Для чего определять количество иммуноглобулинов?
Определение количества антител позволяет определить, сформирован ли долговременный иммунитет. Именно он защищает на организм от повторного заболевания коронавирусом.
Показания к проведению исследования
Показаниями к проведению анализа является:
Наличие симптомов общего недомогания. В этом случае тестирование проводится для подтверждения диагноза.
При контакте с носителем или больным коронавирусной инфекцией.
По желанию – для лабораторной оценке иммунного статуса.
Как проводится тест
Необходимо прийти в Клинику МЕДЕЛ по предварительной записи.
Процедура проводится путем забора крови.
В Клинике МЕДЕЛ результаты изготавливаются в течение 1 дня.
Статьи
Антителогенез у больных HCV-инфекцией
В.И. Лучшев, Т.Я. Чернобровкина, С.Н. Жаров
Кафедра инфекционных болезней, тропической медицины и эпидемиологии, ГОУ ВПО «РГМУ МЗ РФ» (зав. кафедрой – проф. В.И. Лучшев)
Из литературных источников известно, что геном вируса гепатита С (ВГС) кодирует три структурных белка: протеин С (core, ядерный), Е1 и Е2 (протеины оболочки) и четыре неструктурных белка: NS2, NS3, NS4 (A,B), NS5 (A,B). К каждому из белков в организме человека вырабатываются антитела, циркулирующие в крови. В настоящее время предлагается широкий спектр современных иммунологических и молекулярно-биологических диагностических тест-систем, а также гистологических исследований печени для выявления антительных, антигенных маркеров и RNA вируса гепатита С, различающихся своей чувствительностью и специфичностью [1, 2, 5, 8, 10]. Наиболее ранним маркером инфекции является обнаружение в сыворотке крови RNA-HCV через 1-3 недели от момента инфицирования. Однако, положительная RNA-HCV в сыворотке крови регистрируется только у 25% инфицированных ВГС на фоне нормальных уровней активности трансаминаз, поэтому чаще заболевание длительное время не диагностируется [2].
Обычно антитела к структурным белкам выявляются в сыворотке крови через 6-8 недель от инфицирования, причем они не обладают вируснейтрализующими свойствами, достаточными для элиминации вируса. Именно белки внешней оболочки (Е1 и Е2) ВГС имеют участки с высокой частотой аминокислотных замен, в результате которых образуются большое число генотипов и субтипов. Антитела к неструктурным белкам определяются в сыворотке крови несколько позже (через 10 недель от начала болезни) [3, 4, 5, 6]. В литературе появляется все больше данных о предполагаемых функциях и прогностическом значение как антигенов так и антител к ВГС. Считают, что нуклеокапсидный белок активирует апоптоз инфицированных клеток, способствует увеличению числа рецепторов апоптоза на клеточной мембране гепатоцита и повышению чувствительности клетки к проапоптотическим стимулам. Так, за чувствительность к интерферону возможно отвечает NS5 (A,B) белок. Высокий титр антител к поверхностным (структурным) белкам в острой фазе заболевания характеризует благоприятное течение HCV-инфекции [3]. Отсутствие антител к NS5 белку у больных ОГС характерно для периода реконвалесценции [5]. Выявление анти-NS4 ассоциируется с поздними морфологическими стадиями болезни – циррозом печени [4, 7, 9]. Диагностическая интерпретация антител к NS3 неструктурному белку по данным литературы неоднозначна. Кроме того, данные о маркерах вируса С изучались в образцах сыворотки крови больных в основном при моно инфекции HCV. Однако, доказанная репликация ВГС не только в клетках печени, но и в клетках эпителия, кератиноцитах, лимфоидных клетках и даже клетках крови послужила основанием для исследования маркеров ВГС на эритроцитах крови больных [7, 11].
Поэтому целью нашей работы являлось усовершенствование дифференциальной диагностики НСV-инфекции на основании исследования антител к структурным и неструктурным белкам ВГС не только в сыворотке, но и на эритроцитах крови больных.
Материалы и методы
Изучение клинической картины, лабораторных показателей и антителогенеза проводилось у 57 больных, страдающих HCV-инфекцией и микст-инфекцией HCV + HBV. Первую группу пациентов получавших базисную терапию, составили 17 больных с острым гепатитом С (ОГС), вторую 15 с обострением хронического гепатита С (ХГС), третью 25 пациентов с микст-инфекцией HCV+HBV по типу супер-инфекции острый гепатит В на фоне хронического гепатита С (ОГВ+ХГС). Пациенты находились на стационарном лечении в Инфекционной клинической больнице №3 г. Москвы (главный врач – Лазуткина Л.И.).
Верификацию вирусных гепатитов проводили с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Определение спектра антител класса IgM и IgG к вирусу гепатита С в сыворотке и на эритроцитах крови проводилось методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем «ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР» и «ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР- GM» НПО «Диагностические системы» (г. Нижний Новгород). Исследование крови пациентов проводилось в день госпитализации, через 1 месяц. ИФА проводился строго по инструкции прилагаемой к каждой тест-системе с поэтапным добавлением в лунки планшета готовых реагентов. В основе метода лежит реакция рекомбинантных антигенов, сорбированных раздельно на стрипах полистиролового планшета с антителами в исследуемых сыворотках и на эритроцитах крови больных HCV-инфекцией. Венозную кровь брали из локтевой вены натощак и центрифугировали 5 минут с 1500 оборотов в минуту. Сыворотку крови отделяли, помещали в пластиковые контейнеры и хранили в морозильной камере. Верификацию вирусных гепатитов проводили с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Оставшийся осадок так же помещали в морозильную камеру. Перед постановкой реакции, сыворотки крови пациентов размораживались, а осадок крови трижды центрифугировали с физиологическим раствором (0,9% NaCl) в течение 5 минут с частотой 1500 оборотов в минуту с целью приготовления отмытых разрушенных эритроцитов.
Учет результатов проводили спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Рассчитывалась критическая оптическая плотность (ОП) каждого антигена по формуле:
ОП крит. core-Ag = среднее значение ОП К- (core) + 0,2
Реакция считалась положительной при превышении результата над показателем критической ОП не менее чем на 20%.
ИФА проводился в лаборатории кафедры инфекционных болезней, тропической медицины и эпидемиологии РГМУ на базе клинической инфекционной больницы №3.
Результаты и обсуждение
При исследовании спектра маркеров HCV-инфекции в сыворотке и на эритроцитах крови, в условиях динамического наблюдения за больными получены следующие результаты.
У всех больных с моно-HCV-инфекцией при госпитализации в стационар обнаруживаются антитела к ядерному белку ВГС (100%) и в несколько меньшем проценте (84%) у пациентов с микст-инфекцией ОГВ+ХГС. В динамике заболевания сохраняется 100% выявляемость этих антител во всех группах (табл. 1).
Таким образом, наличие антител к core-белку в сыворотке крови практически у всех больных при поступлении в стационар и после базисной терапии может свидетельствовать о наличии у пациента только HCV-инфекции, не указывая на длительность течения и период заболевания. Следовательно, характерный спектр антител к структурному core-белку в сыворотке крови больных будет недостаточным для дифференциальной диагностики HCV-инфекции.
Параллельное определение спектра антител на эритроцитах крови показало, что в них сохраняется наибольшая выявляемость антител к core-белку у всех больных в период разгара и в период реконвалесценции у пациентов с ХГС и микст-инфекцией, в противоположность ОГС (20%, р Задать вопрос Оставить отзыв
Что такое оп сыворотки и оп критическая
ВИЧ-инфекция – медленно текущая ретровирусная инфекция, характеризующаяся пандемическим распространением, развитием синдрома приобретенного иммунодефицита и летальным исходом. Поэтому своевременная и точная лабораторная диагностика этого заболевания имеет важное значение. Она основана прежде всего на идентификации вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и выявлении специфических противовирусных антител. (3, 6, 8, 9)
При массовом скрининге доноров крови и групп риска с целью выявления специфических противовирусных антител используется метод иммуноферментного анализа (ИФА). Метод основан на иммобилизации вирусных антигенов на твердой фазе, сорбции на них антител и выявлении комплексов антиген-антитело с помощью конъюгата антивидового иммуноглобулина с ферментом (8). Преимущества данного метода: можно анализировать большие партии образцов при массовом обследовании населения, возможность автоматизации, использование оборудования, доступного для большинства лабораторий.
Причинами ложноположительных результатов могут быть наличие у пациентов аутоиммунных, онкологических и инфекционных заболеваний. Сыворотки беременных женщин и пожилых людей при постановке ИФА также могут давать серопозитивные результаты (1, 2, 5, 7). Ложноотрицательные результаты возможны в случаях раннего инфицирования, когда уровень антител очень низкий, или в терминальной стадии болезни, характеризующейся глубоким поражением иммунной системы (3).
Целью данной работы является сравнительная оценка чувствительности и специфичности 8 иммуноферментных тест-систем для обнаружения антител к ВИЧ, используемых при скрининге.
В работе были использованы следующие диагностикумы: “ЭКОлаб-Вироностика IV” (“ЭКОлаб”), “ЭКОлаб-ЖЕНЕЛАВИЯ-Микст” (“ЭКОлаб”), “КомбиБест-анти-ВИЧ-1+2” (ЗАО “Вектор-Бест”), “ВИЧ-1, ВИЧ-2-ИФА-Авиценна” (СПб “Авиценна”), “СКРИН-ВИЧ” (ЗАО ПКБ им. И.И.Мечникова), “ПЕПТОСКРИН-2” (ООО “АмерКарД”), “ЭКОлаб-ТЕСТ-ВИЧ-1,2” (ЭКОлаб”), “Амеркард Анти-ВИЧ-1/2К” (ООО АмерКард”). Характеристика тест-систем представлена в таблице 1. Постановку ИФА и учет результатов проводили согласно инструкциям по применению тест-систем. Все образцы были протестированы в реакции иммунного блоттинга с использованием систем “БЛОТ-ВИЧ” (ЗАО “Биосервис”) и “ВЕСТЕРН БЛОТ ВИЧ-1” (“Organon”).
Табл.1 Характеристика ИФА-тест-систем для выявления антител к ВИЧ.
тест-система | антиген | параметры тест-системы | субстрат | ||
ВИЧ 1 | ВИЧ 2 | тип ИФА | |||
Вироностика | рекомбинантный, вирусный лизат, пептиды | р 24gp 160 | env-антиген ВИЧ-2 | сэндВИЧ | ТМБ |
Женелавия | пептиды, рекомбинантный | gp 41 gp 160 | gp 36 | непрямой | ОФД |
Комби-бест | рекомбинантный | __ | __ | сэндВИЧ | ТМБ |
АВИЦЕННА | синтетические пептиды | р 24 gp 120 gp 41 | gp 36 | непрямой | ТМБ |
СКРИН-ВИЧ | рекомбинантный | р 24 р 17 gp 41 gp 120 | gp 110 gp 38 | непрямой | ОФД |
ПЕПТОСКРИН-2 | пептиды | gp 41 gp 120 | gp 32 | непрямой | ОФД |
ЭКОлаб-ТЕСТ ВИЧ 1,2 | рекомбинантный | р 24 р 17 gp 41 gp 120 | gp 38 | непрямой | ОФД |
АМЕРКАРД | рекомбинантный | gp 41 р 55 | gp 32 | непрямой | ОФД |
Учет результатов ИФА проводили на оборудовании фирмы Sanofi (Франция) – на ридере PR 2100 измеряли оптическую плотность (ОП) исследуемых образцов сыворотки крови. Уровень “среза” (ОП критическое) для каждой тест-системы рассчитывался согласно инструкциям. За “серую зону” принимали значения ОП в интервале + 10% от уровня “среза”. Образцы считали положительными, если значения их ОП были выше “серой зоны”. Образцы считали сомнительными, если значения их ОП находились в пределах “серой зоны”. Образцы считали отрицательными, если значения их ОП были ниже “серой зоны”.
Показатели специфичности в нашем исследовании варьировали от теста к тесту. Так, для здоровых доноров крови этот показатель составил 100%. При исследовании сывороток, полученных от больных вирусными гепатитами В и С специфичность изменялась от 3% (“Скрин-ВИЧ”) до 97% (“КомбиБест-анти-ВИЧ-1,2”) (таблица 2). Данный факт может быть объяснен, с одной стороны, недостаточной специфичностью оцениваемых диагностикумов, а с другой – наличием перекрестных реакций неспецифических факторов в сыворотках с компонентами тест-систем.
Табл. 2 Процент специфичности тест-систем для диагностики ВИЧ-инфекции.
Диагностикум | доноры | ВИЧ-негативные в иммуноблоте | больные гепатитом В и С |
“Вироностика” | 100 % | 75 % | 88 % |
“Женелавия” | 100 % | 84,3 % | 88 % |
“Комби-Бест” | 100 % | 90 % | 97 % |
“Авиценна” | 89,5 % | 52,5 % | 60 % |
“Скрин-ВИЧ” | 100 % | 17,5 % | 3 % |
“Пептоскрин-2” | 93,8 % | 62,5 % | 74 % |
“ЭКОлаб-тест ВИЧ 1,2” | 89,5 % | 28,3 % | 26 % |
“АмерКард” | 87,3 % | 55,8 % | 74 % |
При оценке ложноположительных результатов нами были получены следующие данные (табл.3)
Табл.3 Процент ложноположительных результатов в ИФА-системах.
Тест-Система | ВИЧ-негативные в иммуноблоте | больные гепатитом В и С | ||
серая зона, % | ложнополо-жительные результаты, % | серая зона, % | ложнополо-жительные результаты, % | |
“Вироностика” | 10 | 16,7 | 2,8 | 8,6 |
“Женелавия” | 8,3 | 11,7 | 2,8 | 8,6 |
“Комби-Бест” | 4,2 | 5,8 | 2,8 | * |
“Авиценна” | 5,0 | 24,2 | 8,6 | 34,3 |
“Скрин-ВИЧ” | 4,2 | 45,8 | 2,8 | 97,1 |
“Пептоскрин-2” | 8,3 | 24,2 | 14,3 | 14,3 |
“ЭКОлаб-тест ВИЧ 1,2” | 9,2 | 32,5 | 17,1 | 60,0 |
“АмерКард” | 7,5 | 36,7 | 20,0 | 5,7 |
* таких результатов нет
Таким образом, наибольшей специфичностью обладают тест-системы “Комби-Бест”, “Женелавия” и “Вироностика”. Остальные тест-системы дают высокий процент ложноположительных результатов, которые не подтверждаются в иммуноблоте.
Процент выявления антител к ВИЧ в серопозитивных образцах практически во всех ИФА-системах составил 100%. В тест-системах “ЭКОлаб-Женелавия-Микст” и “Авиценна” чувствительность была 97,9%. Наименьшая чувствительность из исследуемых диагностикумов была в тест-системе “Пептоскрин-2” – 89,6%. Эти результаты могут свидетельствовать о недостаточной чувствительности перечисленных тест-систем и о высокой вероятности получения ложнонегативных результатов.
Результаты проведенного исследования позволяют сделать выводы о том, что для массового тестирования на ВИЧ-инфекцию наиболее подходят такие высоко специфичные и чувствительные тест-системы, как “Комби-Бест-анти-ВИЧ-1,2”, “ЭКОлаб-Вироностика IV” и “ЭКОлаб-Женелавия-Микст”. Остальные диагностикумы могут давать высокий процент как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов.
В заключении необходимо отметить, что при тестировании сыворотки крови на ВИЧ-инфекцию следует принимать во внимание неодинаковую чувствительность и специфичность различных тест-систем и использовать несколько диагностикумов с различным принципом постановки реакции, особенно для сывороток крови с низким уровнем антител к ВИЧ и для тестирования донорской крови.