что такое контрольные тестовые штаммы

Контрольные штаммы микроорганизмов BD Microtrol

Контрольные штаммы микроорганизмов BD Microtrol™ выполнены в виде дисков и предназначены для использования в микробиологических лабораториях для выполнения контрольных испытаний. Они являются первым поколением национальных штаммов микроорганизмов и пригодны для использования в аккредитованных лабораториях для получения рабочих стоковых культур (см. Ограничения). Диски BD Microtrol™ образуются путём лиофильной сушки микробных культур, получаемых исключительно из культур коллекций клеточных банков NCTC (Национальная коллекция типовых культур) и NCPF (Национальная коллекция патогенных грибов). Жизнеспособность микроорганизмов стабилизирована путём добавления активированного угля и силиконового геля.

В каждом диске от 10 6 до 10 9 микроорганизмов.

Диски BD Microtrol™ после их восстановления представляют собой чистые культуры микроорганизмов с известными свойствами, которые используются для следующих целей:

Меры предосторожности и хранение:

Изъятия дисков из флаконов: Диск можно достать из флакона с помощью стерильного пинцета или стерильной микробиологической петли на 10 мкл.

Использование на твердой среде: Поместите диск на подходящую твердую среду. Оставить диск на 10-15 минут для размягчения. Чашка может быть поставлена в инкубатор для ускорения этого процесса. Распределите размягченный диск по поверхности чашки и инкубируйте в подходящих для данного микроорганизма условиях.

Использование в жидкой среде: Внесите диск во флакон с 1-10 мл подходящей питательной средой. Избегая образования аэрозоля, осторожно перемешивайте среду до полного растворения диска и проводите инкубацию в подходящих условиях до получения стоковой культуры.

Можно использовать альтернативный метод, при котором среда с диском для его быстрого растворения помещается в инкубатор на 1 час при температуре 35 – 37 °C и после этого сразу используется. Выбор лучшего способа приготовления стоковой культуры можно подобрать экспериментальным путём.

Ограничения: Повторное использования приготовленной стоковой культуры может привести к изменению ее свойств. Рекомендуется для каждого цикла экспериментов использовать свежий диск.

Меры безопасности и утилизация:

Каталог «BD Промышленная Микробиология» на русском языке.

Источник

ЭТАЛОННЫЙ ШТАММ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЕГО КАЧЕСТВА

Эталонный тест-штамм– это чистая культура микроорганизма, данного вида, которая имеет характерные физиологические, морфологические и биохимические свойства.

Направления использования эталонных тест-культур микроорганизмов:

• для проверки ростовых свойств питательных сред;

• для валидации методов контроля качества;

• для проверки пригодности методов испытания [1].

Перечень определений, связанных с эталонным штаммом:

Источники контрольных штаммов микроорганизмов.

Эталонные (референтные) штаммы можно получить из следующих международных коллекций:

• Национальный центр государственной коллекции возбудителей бактериальной инфекции III – IV групп патогенности (Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича);

• Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов ВКПМ;

• Всероссийская коллекция непатогенных микроорганизмов ИБФМБ;

• Американская коллекция типовых культур (АТСС), а также штаммы других национальных и международных коллекций [2].

Хранение контрольных штаммов микроорганизмов

Контрольные штаммы хранят в лиофилизированном состоянии, в замороженном виде, в среде с криопротектором или на среде хранения в условиях и на протяжении сроков, приведенных ниже.

Таблица 1. Хранение контрольных штаммов микроорганизмов

Восстановление контрольных штаммов микроорганизмов

Для получения рабочих культур делают высев из субкультуры референтного образца. Со среды хранения штамм рассевают на плотные неселективные питательные питательные потребности соответствующих микроорганизмов (1 пассаж). Посевы инкубируют в подходящих для роста условиях. При отсутствии роста на плотной среде культуру засевают на соответствующую жидкую питательную среду. После инкубирования делают высев на плотную питательную среду (1 пассаж). Так как микроорганизмы после 1 пассажа обладают пониженной жизнеспособностью, рекомендуется в качестве рабочих культур использовать культуры 2 или 3 пассажа [3].

Проверка культур контрольных штаммов

Выросшую на питательномагаре культуру контрольного штамма визуально проверяют на чистоту роста и отсутствие диссоциации или просматривая под стереоскопическим микроскопом (лупой) в «проходящем свете». При выявлении контаминации или диссоциации следует уничтожить использованную пробирку с субкультурой референтного образца [3].

Методы оценки качества питательных сред

Оценку качества испытуемой среды по микробиологическим критериям проводят с помощью одного из методов:

Выбор метода контроля определяется видами питательных сред и целямиконтроля (чувствительность, специфичность, селективность и т.д.).

Перечень необходимых контрольных штаммов указывается в сертификате на данную коммерческую среду либо указан в приложении к настоящей стандартизованной технологии на основные питательные среды.

• Качественный метод (посев морфологических характеристик роста микроорганизма на исследуемой питательной среде или дифференцирующих свойств питательной среды (для дифференциально-диагностических сред). Для контроля качества дифференциально-диагностических сред необходимо использовать как контрольные штаммы микроорганизмов, дающие положительный результат, так и штаммы, дающие отрицательный результат теста на данной среде.

Микробиологические критерии качества питательной среды

При использовании контрольных штаммов по их росту на испытуемой питательной среде можнотоценить следующие микробиологические критерии качества питательной среды:

• типичность морфологических, культуральных характеристик микроорганизма;

• чувствительность (продуктивность) среды;

• селективность (для селективных сред);

• специфичность, выраженность отличительных признаков различных микроорганизмов для дифференциально-диагностических сред;

• величина зон задержки роста вокруг дисков с антибиотиками для контроля сред и качества дисков с антибиотиками для диско-диффузионного метода определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Интерпретация результатов оценки качества питательной среды

При использовании качественного метода контроля питательных сред оценивается скорость роста, величина колоний, морфология колоний и наличие других признаков, свойственных для контрольного штамма, например, гемолиз, пигмент и т.д.

При оценке качества неселективных количественным методом чувствительность (продуктивность) питательной среды должна составлять не менее 70%. На селективных средах чувствительность среды для целевого микроорганизма должна быть не менее 50-70% (в зависимости от вида среды), а рост нецелевых микроорганизмов должен частично или полностью подавляться.

Поддержание культур контрольных штаммов микроорганизмов

Библиографический список

Бакулов, И.А. Эпизоотология с микробиологией [Текст] / Бакулов И.А. – Москва: Агропромиздат, 1987. – 415 с.

Меньшиков, В.В Стандартизированная технология. Внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований [Текст] / Меньшиков В.В. – Москва: Федерация лабораторной медицины, 2014. – 80 с.

Источник

Что такое контрольные тестовые штаммы

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ
К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии (Н.А.Семина, С.В.Сидоренко); Государственным научным центром по антибиотикам (С.П.Резван, С.А.Грудинина); Научно-исследовательским институтом антимикробной химиотерапии Смоленской государственной медицинской академии (Л.С.Страчунский, О.У.Стецюк, Р.С.Козлов, М.В.Эйдельштейн); Кафедрой микробиологии и химиотерапии Российской медицинской академии последипломного образования (Е.А.Ведьмина, Л.Г.Столярова, И.В.Власова); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (З.С.Середа).

3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН «Методических указаний по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков», утв. Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР В.Е.Ковшило 10 марта 1983 г. N 2675-83.

1. Область применения

1.1. В настоящих методических указаниях изложены стандартные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (методы серийных разведений и диско-диффузионный метод).

1.2. Методические указания предназначены для применения в микробиологических лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы и здравоохранения.

2. Общие сведения

Однако внедрение в клиническую практику значительного количества новых АБП и появление новых механизмов антибиотико-резистентности у микроорганизмов потребовало более строгой стандартизации процедуры тестирования, разработки новых подходов к интерпретации результатов, внедрения современной системы внутреннего контроля качества на каждом этапе исследования.

В настоящих методических указаниях систематизированы современные подходы к определению чувствительности бактериальных возбудителей инфекционных заболеваний человека, учитывающие рекомендации Европейского комитета по определению чувствительности к антибиотикам, а также Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам США.

Исследования чувствительности микроорганизмов к АБП осуществляются для решения следующих задач:

— обоснование целенаправленной индивидуальной антибактериальной терапии для лечения конкретной инфекционной болезни отдельным пациентам;

— обоснование эмпирической терапии отдельных нозологических форм инфекционных болезней в пределах лечебных учреждений или географических регионов;

— осуществление наблюдения за распространением антибиотико-резистентности в отдельных учреждениях или географических регионах;

— исследование новых химических соединений на наличие антибактериальной активности.

3. Показания для исследования чувствительности микроорганизмов
к антибактериальным препаратам

В ходе повседневной деятельности в бактериологических лабораториях из различных биологических материалов и объектов внешней среды выделяют множество бактерий, относящихся к различным таксономическим группам. Однако определение чувствительности выделенных микроорганизмов к АБП показано далеко не во всех случаях. Определение показаний для исследования чувствительности микроорганизмов к АБП является обязанностью врача-бактериолога.

Определять чувствительность к АБП представителей нормальной микрофлоры человека, при их выделении из естественных мест обитания, бактерий, выделенных из объектов внешней среды, за исключением случаев проведения специальных исследований, нецелесообразно.

Обязательному исследованию на чувствительность к АБП подлежат все микроорганизмы, выделенные из первично стерильных жидкостей, органов и тканей человека. В остальных случаях оценке чувствительности должна предшествовать оценка клинической значимости выделенного микроорганизма.

Определение чувствительности выделенного штамма микроорганизма показано, если уровень его устойчивости к АБП не может быть предсказан на основании данных идентификации или вероятной таксономической принадлежности микроорганизма. Практически важной задачей является выявление приобретенной резистентности к АБП у природно-чувствительных к ним микроорганизмов. Подтверждение природной чувствительности или резистентности микроорганизма к АБП не является целью практических исследований.

Исследованию по оценке антибиотикочувствительности подлежат чистые культуры микроорганизмов или материал изолированных колоний с плотных питательных сред после первичного посева образца клинического материала, в последнем случае параллельно необходимо провести идентификацию культуры.

При обнаружении на плотных питательных средах после первичного посева смешанной культуры исследовать антибиотикочувствительность до идентификации и оценки этиологической значимости отдельных микроорганизмов нецелесообразно.

Прямое определение чувствительности с использованием клинического материала (без выделения чистой культуры) возможно только в исключительных случаях при условии подтверждения однородности культуры и высокой степени обсемененности при окраске по Граму, причем исследование следует повторить после выделения чистой культуры микроорганизма.

Следует уделять особое внимание определению чувствительности микроорганизмов, относящихся к таксономическим группам, для которых характерна высокая частота распространения приобретенной резистентности.

Факты выявления резистентности у микроорганизмов, для которых этот феномен ранее не был описан в научной литературе, следует оценивать с крайней осторожностью и рекомендуется обращаться за консультациями в лаборатории, занимающиеся изучением антибиотико-резистентности.

Не следует в практических целях исследовать микроорганизмы, для которых методы определения чувствительности в настоящее время не стандартизованы и отсутствуют критерии интерпретации результатов. Результаты, полученные в данном случае, не могут служить основанием для назначения антибактериального препарата, если соответствующая нозологическая форма не приведена в утвержденной инструкции по его применению.

4. Методы определения чувствительности микроорганизмов
к антибактериальным препаратам

4.1. Общая характеристика методов

Современные стандартизованные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП подразделяют на методы серийных разведений и диффузионные.

Для определения МПК заданные концентрации АБП вносят в питательную среду, которую затем засевают культурой исследуемого микроорганизма и после инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста.

В зависимости от характера используемой питательной среды различают методы серийных разведений в агаре или в бульоне. В зависимости от объема используемой жидкой питательной среды выделяют методы серийных макро- и микроразведений.

Разновидностью метода серийных разведений является также метод, основанный на использовании только двух концентраций АБП, соответствующих пограничным значениям МПК (см. ниже). Этот принцип исследования широко используется в автоматизированных системах для определения чувствительности микроорганизмов.

Диффузионные методы определения чувствительности основаны на диффузии АБП из носителя в плотную питательную среду и подавлении роста исследуемой культуры в той зоне, где концентрация АБП превосходит МПК.

В настоящее время существуют две основные модификации диффузионного метода: диско-диффузионный и Е-тест.

В диско-диффузионном методе в качестве носителя АБП используют бумажный диск. Образование зоны подавления роста происходит в результате диффузии АБП из носителя в питательную среду. В определенных пределах величина диаметра зоны подавления роста обратно пропорциональна МПК. Однако диско-диффузионный метод позволяет лишь косвенно судить о величине МПК, а результатом исследования является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности (чувствительный, промежуточный или резистентный).

Е-тест представляет собой узкую полоску полимера (0,5х6,0 см), на которую нанесен градиент концентраций АБП (от минимальных до максимальных). Подавление роста микроорганизма вокруг полоски Е-теста происходит только в той зоне, где концентрация АБП, диффундирующего из носителя, выше МПК, при этом образуется каплевидная зона ингибиции. Значения концентрации АБП в каждом участке носителя типографским способом нанесены на наружной (обращенной к исследователю) поверхности Е-теста. Величину МПК учитывают в том месте, где граница зоны подавления роста вплотную подходит к носителю. Детальные инструкции по определению чувствительности с использованием Е-тестов прилагаются изготовителем к набору реактивов.

4.1.1. Основные этапы проведения тестирования

Оценка антибиотикочувствительности, независимо от конкретного метода, предполагает последовательное выполнение нескольких этапов:

— приготовление питательных сред;

— приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма);

— учет и интерпретация результатов, формулировка рекомендаций по лечению.

Диффузионные методы включают также этап наложения дисков или полосок Е-теста на плотную питательную среду.

4.1.2. Приготовление питательных сред для определения чувствительности

Для оценки чувствительности используют специально предназначенные для этой цели среды, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке и по своим характеристикам удовлетворяющие требованиям, приведенным в разделе 5. Внутрилабораторный контроль качества среды проводят при использовании всех сред, разрешенных к применению в Российской Федерации в установленном порядке.

Вид питательной среды для оценки чувствительности определяют выбранным методом проведения исследования (агар или бульон), а также видом тестируемого микроорганизма.

Выбранную питательную среду для определения чувствительности готовят из сухой среды промышленного производства в соответствии с инструкцией изготовителя. После автоклавирования питательную среду сразу же разливают в стерильные пробирки или в чашки Петри, или (если необходимо) колбы со средой помещают на водяную баню при 48-50 °С, где выдерживают до достижения указанной температуры, после чего в них асептически вносят термолабильные питательные добавки и/или рабочие растворы антибиотиков, а затем разливают в пробирки или в чашки Петри.

4.1.3. Приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма)

Общим и принципиально важным для всех методов тестирования является стандартизация суспензии исследуемого микроорганизма, ее концентрация должна составлять 1,5·10 КОЕ/мл. Практически наиболее приемлемым методом оценки концентрации бактериальной суспензии является измерение ее оптической плотности. Оптическая плотность бактериальной суспензии с концентрацией 1,5·10 КОЕ/мл при визуальном контроле соответствует стандарту мутности 0,5 по МакФарланду. Контроль оптической плотности суспензии можно также осуществлять спектрофотометрически (денситометрически). Существуют коммерчески доступные стандарты мутности и спектрофотометры. Бактериальную суспензию можно готовить либо из бульонной, либо из агаровой культуры.

Приготовление инокулюма из агаровой культуры

Для приготовления инокулюма используют чистую суточную культуру микроорганизмов, выросших на плотных питательных средах. Отбирают несколько однотипных, четко изолированных колоний, выросших на неселективных плотных питательных средах. Петлей переносят незначительное количество материала с верхушек колоний в пробирку со стерильным физиологическим раствором или питательным бульоном, доводя плотность инокулюма точно до 0,5 по стандарту МакФарланда. Инокулюм следует использовать в течение 15 мин после приготовления.

Приготовление инокулюма из бульонной культуры

При определении чувствительности быстро растущих бактерий с обычными питательными потребностями для приготовления инокулюма также можно использовать 5-6-часовую бульонную культуру микроорганизма. Для этого отбирают несколько однотипных изолированных колоний, петлей переносят незначительное количество материала в пробирку с 4,0-5,0 мл жидкой неселективной питательной средой. Инкубируют при 35 °С. Через 5-6 ч инкубации плотность микробной суспензии приблизительно соответствует необходимой, и ее точно доводят до 0,5 по МакФарланду путем добавления стерильного бульона или физиологического раствора.

Стандарт МакФарланда может быть либо приобретен, либо приготовлен в лаборатории.

4.1.4. Приготовление стандарта 0,5 по МакФарланду

К 0,5 мл раствора ВаСl в концентрации 0,048 моль/л (1,175% раствор ВаСl ·2H O) медленно при тщательном перемешивании добавить 99,5 мл раствора H SO в концентрации 0,18 моль/л (1%) до получения гомогенной суспензии.

Правильность приготовления суспензии необходимо проверить на спектрофотометре. Поглощение при использовании кюветы 1 см должно составить 0,08-0,10 при длине волны 625 нм.

Полученную суспензию необходимо разлить по 4-6 мл в пробирки с герметично закрывающимися крышками. Пробирки должны быть такого же диаметра, как и используемые для приготовления бактериальной суспензии.

Хранить пробирки с суспензией необходимо в темноте при комнатной температуре.

Перед использованием пробирки необходимо тщательно встряхивать и оценивать однородность суспензии. При появлении видимых частиц пробирки изымаются из употребления.

Стандарт мутности необходимо обновлять или проверять его оптическую плотность ежемесячно.

4.2. Методы серийных разведений

4.2.1. Приготовление растворов АБП для методов серийных разведений

Источник

Контрольные штаммы микроорганизмов BD Microtrol

Контрольные штаммы микроорганизмов BD Microtrol выполнены в виде дисков и предназначены для использования в бактериологических лабораториях для выполнения контрольных исследований.

Микротрол являются первым поколением национальных штаммов микроорганизмов и пригодны для использования в аккредитованных лабораториях для получения рабочих исходных («чистых») культур.

Представляют собой лиофилизированные микробных культуры, полученные исключительно из культур коллекций клеточных банков NCTC (Национальная коллекция типовых культур) и NCPF (Национальная коллекция патогенных грибов). Жизнеспособность микроорганизмов стабилизирована благодаря уникальному химическому составу диска.

Каталожный номер

Наименование

Кол-во в упаковке

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Aspergillus niger, ATCC 16404

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Bacillus cereus, NCTC 7464 (ATCC 10876)

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Bacillus subtilis, ATCC 6633

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Bacteroides fragilis, ATCC 25285

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Campylobacter jejuni, NCTC 11322 (ATCC 29428)

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Candida albicans, ATCC 2091

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Candida albicans, ATCC 10231

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Citrobacter freundii, ATCC 8090

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Clostridium perfringens, ATCC 13124

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Clostridium sporogenes, ATCC 19404

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Enterobacter aerogenes, ATCC 13048

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Enterobacter cloacae, ATCC 23355

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Enterococcus faecalis, ATCC 19433

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Enterococcus faecalis, ATCC 29212

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Enterococcus faecalis, ATCC 51299

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Enterococcus hirae, ATCC 10541

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Escherichia coli, ATCC 8739

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Escherichia coli, ATCC 10536

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Escherichia coli, ATCC 25922

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Escherichia coli, ATCC 35218

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Haemophilus influenzae, NCTC 8468 (ATCC 9934)

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Haemophilus influenzae, ATCC 49247

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Klebsiella aerogenes, NCTC 9528

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Klebsiella pneumonia, ATCC 13883

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Klebsiella pneumoniae, ATCC 700603

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Listeria monocytogenes, NCTC 7973 (ATCC 35152)

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Listeria monocytogenes, NCTC 11994

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Proteus mirabilis, ATCC 14153

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Proteus vulgaris, ATCC 13315

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, ATCC 9027

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, ATCC 27853

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Salmonella poona, NCTC 4840

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Salmonella typhimurium, ATCC 14028

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Staphylococcus aureus, ATCC 6538

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Staphylococcus aureus, ATCC 6538P

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Staphylococcus aureus, NCTC 6571 (ATCC 9144)

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Staphylococcus aureus, ATCC 25923

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Staphylococcus aureus, ATCC 29213

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Staphylococcus aureus (MRSA), NCTC 12493

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Staphylococcus aureus (MRSA), ATCC 43300

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Staphylococcus epidermidis, ATCC 12228

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Streptococcus agalactiae, ATCC 13813

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Streptococcus pneumoniae, ATCC 6303

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Streptococcus pneumoniae, ATCC 49619

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Streptococcus pyogenes, ATCC 19615

Диски BD Микротрол с чистой культурой микроорганизмов Yersinia enterocolitica, ATCC 9610

Источник