что такое колиформы в почве
Выявление колиформ как идеальный метод оценки чистоты воды и продуктов
Под определение «колиформы» попадает несколько групп бактерий. По всем культуральным и морфологическим признакам это энтеробактерии из группы кишечной палочки. Они имеют несколько общих черт и являются санитарно-показательными микроорганизмами, так как выявление их в воде, почве или других средах говорит о фекальном загрязнении исследуемых образцов.
Какие они, колиформные микроорганизмы
Колиформы – собирательное название, оно объединяет в себе такие бактерии, как:
Кишечная палочка присутствует в каждом организме, и никаких последствий для здоровья человека это не приносит, пока показатель не превышает естественное число этих бактерий. Но когда норма по каким-либо причинам превышается, то появляются симптомы дисбактериоза, который в большинстве случаев успешно лечится стационарно. У кишечной палочки выделяют две группы представителей: нормальные и патогенные. Лактозопозитивные и лактозонегативные не опасны, а серотип О157:Н7 является причиной тяжелых пищевых отравлений.
Палочковидные бактерии энтеробактер есть в почве и воде, а также в кишечнике млекопитающих. Некоторых представителей этого рода удалось выделить из корней растений. Они – возбудители инфекций мочевыводящих путей и пищевых инфекций.
Микроорганизмы цитробактер предпочитают водную среду, встречаются в земле и пищевых продуктах. Они вызывают заболевания только на фоне ослабленной иммунной системы.
Клебсиеллы – это простейшие, способные образовывать защитную капсулу. Такие колиформы, помимо кишечника, есть на слизистых оболочках и на коже. Их присутствие в воде, почве и растениях делает возможным содержание клебсиелл во фруктах и овощах.
Гафнии – род палочек, имеющих отрицательную окраску по Граму, живущих в организмах человека, птиц и пчел. Их нередко выделяют из меда, речной рыбы, молочных продуктов.
Перечисленные колиформы являются своеобразными индикаторами, указывающими на возможное присутствие в пробе патогенных микроорганизмов.
Классификация колиформных микроорганизмов
Все описываемые бактерии группы кишечной палочки способны ферментировать лактозу, только происходит это при различных температурах. Поэтому выделяют:
Их достаточно просто обнаружить в воде и подсчитать количество. Общих колиформных (как и термотолерантных) микроорганизмов в ней не должно быть вообще. Иначе жидкость признается недостаточно очищенной и непригодной для питья.
Как проводят исследования в лабораториях?
Колиформы, выявленные в исследуемых образцах, имеют различное санитарно-эпидемиологическое значение. Если в молоке, воде или земле будут найдены термотолерантные бактерии рода Эшерихия – это прямое доказательство того, что имеет место свежее фекальное загрязнение.
Присутствие простейших из родов Цитробактер или Энтеробактер скажет о том, что в исследуемой среде произошло загрязнение несколько недель назад. Их наличие менее значимо.
Если человек был болен дизентерией или брюшным тифом, то в микрофлоре к моменту выздоровления обнаружатся лактозоотрицательные виды кишечной палочки. Они называются так потому, что потеряли способность сбраживать лактозу. А вот колиформы, которые не будут расти в цитратной среде Козера и смогут ферментировать углеводы при температуре от 43 до 45°C, подскажут врачам, что имеет место свежее фекальное загрязнение.
Бактерии группы кишечных палочек выявляют с использованием питательной среды Кода. Она позволяет найти и опознать энтеробактерии по их способности ферментировать лактозу. Если в исследуемых образцах будут присутствовать колиформы, то среда Кода либо поменяет исходный зеленый цвет на желтый и помутнеет, либо будет наблюдаться только помутнение.
Термотолерантные и прочие колиформы хорошо определяются на других питательных составах (мясопептонном бульоне и мясопептонном агаре). Если исследования проводятся с помощью среды Эндо, то на ней они проявятся в виде плоских красных колоний. Кишечная палочка образует колонию с металлическим блеском темного цвета.
Нужно помнить, что патогенные колиформные штаммы попадают в организм фекально-оральным путем:
Так как в домашних условиях определить наличие колиформных бактерий в воде или продуктах нельзя, то превентивные меры – лучший способ уберечь себя от заболеваний.
Образование высшее филологическое. В копирайтинге с 2012 г., также занимаюсь редактированием/размещением статей. Увлечения — психология и кулинария.
Законодательная база Российской Федерации
Бесплатная горячая линия юридической помощи
Бесплатная консультация
Навигация
Федеральное законодательство
Действия
7. Определение общих колиформных бактерий (БГКП)
Бактерии группы кишечной палочки включают следующие роды: эшерихия, клебсиелла, энтеробактер, цитробактер и серрации.
При анализе почв, для которых предполагается невысокая степень фекального загрязнения, рекомендуется проводить определение титрационным методом. В качестве ускоренного метода для анализа слабозагрязненных почв рекомендуется использовать метод мембранной фильтрации. При анализах проб с предполагаемой высокой степенью фекального загрязнения можно проводить прямой поверхностный посев разведения суспензии на поверхность среды Эндо.
Для исследования используют предварительно подготовленные почвенные суспензии и разведения по описанной выше методике.
Посев меньших количеств (0,01 г, 0,001 г, то есть 10(2), 10(3) и т.д.) делают по 1,0 куб. см из соответствующих разведений почвенной суспензии в пробирки с 9,0 куб. см тех же сред. Титрование проводят до разведения 1:1000000, то есть 10(6) с регулярной сменой пипеток при переходе от одного разведения к другому. Посевы инкубируют в течение 48 ч при (37 +/- 1) °C, через (24 +/- 2) ч инкубации проводят предварительную оценку посевов. Отсутствие газообразования и помутнения через 48 ч инкубации выдают окончательный отрицательный ответ.
В качестве ускоренного метода для обнаружения колиформных бактерий целесообразно использовать метод мембранных фильтров.
Мембранные фильтры должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указаниями изготовителя.
Воронку и столик фильтровального аппарата обтирают марлевым (ватным) тампоном, смоченным спиртом ректификованным, и фламбируют. После охлаждения на столик фильтровального аппарата кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его воронкой.
В воронку прибора для фильтрования наливают отмеренный объем, затем создают вакуум.
При посеве нескольких объемов одной пробы следует фильтровать через один фильтровальный аппарат без обеззараживания сначала меньшие, а затем большие объемы, меняя каждый раз фильтры. Перед фильтрованием каждой новой пробы прибор обеззараживают.
Следует начинать с фильтрования проб, которые предположительно не загрязнены, а затем фильтровать загрязненные пробы. После окончания фильтрования и осушения фильтра отключают вакуум, воронку снимают, фильтр осторожно поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят его, не переворачивая, на питательную среду Эндо с добавлением розоловой кислоты, разлитую в стерильные чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Эта среда используется только при работе методом мембранной фильтрации. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.
Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч.
Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые, выдают отрицательный ответ: отсутствие БГКП в исследуемой почве.
Анализ заканчивают через 24 ч.
Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим блеском или без него или других подобного типа колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра, подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к БГКП.
Для подтверждения наличия БГКП исследуют:
— все колонии, если на фильтрах выросло менее 5 колоний;
Каждую выбранную изолированную колонию исследуют на:
— наличие оксидазной активности;
— принадлежность к Граму (микроскопия окрашенного по Граму препарата или постановка теста Грегерсена);
— ферментацию лактозы до кислоты и газа.
Для расчета индекса количества бактерий группы кишечных палочек, выросших в анализируемом объеме почвы, умножают на 1000 и делят на этот объем.
При анализе загрязненных и сильно загрязненных почв, отобранных в местах интенсивного фекального загрязнения, рекомендуется проводить прямой поверхностный посев почвенной суспензии в количестве 0,1 или 0,2 куб. см на поверхность среды Эндо и немедленно равномерно распределять по поверхности шпателем. Посев при анализах сравнительно чистых почв производится из разведении от 1:10 до 1:1000, то есть от 10(1) до 10(3). При работе с загрязненными почвами обычно используют разведения до 10(6). Посевы выращивают в термостате при (37 +/- 1) °C в течение 24 ч. Следующий этап исследований заключается в идентификации выросших микроорганизмов, который проводится аналогично определению общих колиформных бактерий титрационным методом и подсчету количества колиформных бактерий в 1 г почвы, для чего среднее число колиформных колоний, выросших на чашке, умножается на степень десятикратного разведения.
«МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ПОЧВЫ. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24.12.2004 N ФЦ/4022)
7. Определение общих колиформных бактерий (БГКП)
Бактерии группы кишечной палочки включают следующие роды: эшерихия, клебсиелла, энтеробактер, цитробактер и серрации.
При анализе почв, для которых предполагается невысокая степень фекального загрязнения, рекомендуется проводить определение титрационным методом. В качестве ускоренного метода для анализа слабозагрязненных почв рекомендуется использовать метод мембранной фильтрации. При анализах проб с предполагаемой высокой степенью фекального загрязнения можно проводить прямой поверхностный посев разведения суспензии на поверхность среды Эндо.
Для исследования используют предварительно подготовленные почвенные суспензии и разведения по описанной выше методике.
Посев меньших количеств (0,01 г, 0,001 г, то есть 10(2), 10(3) и т.д.) делают по 1,0 куб. см из соответствующих разведений почвенной суспензии в пробирки с 9,0 куб. см тех же сред. Титрование проводят до разведения 1:1000000, то есть 10(6) с регулярной сменой пипеток при переходе от одного разведения к другому. Посевы инкубируют в течение 48 ч при (37 +/- 1) °C, через (24 +/- 2) ч инкубации проводят предварительную оценку посевов. Отсутствие газообразования и помутнения через 48 ч инкубации выдают окончательный отрицательный ответ.
В качестве ускоренного метода для обнаружения колиформных бактерий целесообразно использовать метод мембранных фильтров.
Мембранные фильтры должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указаниями изготовителя.
Воронку и столик фильтровального аппарата обтирают марлевым (ватным) тампоном, смоченным спиртом ректификованным, и фламбируют. После охлаждения на столик фильтровального аппарата кладут фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его воронкой.
В воронку прибора для фильтрования наливают отмеренный объем, затем создают вакуум.
При посеве нескольких объемов одной пробы следует фильтровать через один фильтровальный аппарат без обеззараживания сначала меньшие, а затем большие объемы, меняя каждый раз фильтры. Перед фильтрованием каждой новой пробы прибор обеззараживают.
Следует начинать с фильтрования проб, которые предположительно не загрязнены, а затем фильтровать загрязненные пробы. После окончания фильтрования и осушения фильтра отключают вакуум, воронку снимают, фильтр осторожно поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят его, не переворачивая, на питательную среду Эндо с добавлением розоловой кислоты, разлитую в стерильные чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Эта среда используется только при работе методом мембранной фильтрации. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.
Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч.
Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые, выдают отрицательный ответ: отсутствие БГКП в исследуемой почве.
Анализ заканчивают через 24 ч.
Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим блеском или без него или других подобного типа колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра, подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к БГКП.
Для подтверждения наличия БГКП исследуют:
— все колонии, если на фильтрах выросло менее 5 колоний;
Каждую выбранную изолированную колонию исследуют на:
— наличие оксидазной активности;
— принадлежность к Граму (микроскопия окрашенного по Граму препарата или постановка теста Грегерсена);
— ферментацию лактозы до кислоты и газа.
Для расчета индекса количества бактерий группы кишечных палочек, выросших в анализируемом объеме почвы, умножают на 1000 и делят на этот объем.
При анализе загрязненных и сильно загрязненных почв, отобранных в местах интенсивного фекального загрязнения, рекомендуется проводить прямой поверхностный посев почвенной суспензии в количестве 0,1 или 0,2 куб. см на поверхность среды Эндо и немедленно равномерно распределять по поверхности шпателем. Посев при анализах сравнительно чистых почв производится из разведении от 1:10 до 1:1000, то есть от 10(1) до 10(3). При работе с загрязненными почвами обычно используют разведения до 10(6). Посевы выращивают в термостате при (37 +/- 1) °C в течение 24 ч. Следующий этап исследований заключается в идентификации выросших микроорганизмов, который проводится аналогично определению общих колиформных бактерий титрационным методом и подсчету количества колиформных бактерий в 1 г почвы, для чего среднее число колиформных колоний, выросших на чашке, умножается на степень десятикратного разведения.