что такое ифа и пцр диагностика инфекций
ПЦР и ИФА при инфекции. В чем разница?
В последнее время такие методы лабораторных исследований, как ПЦР и ИФА, у многих на слуху. Это две разные методики, позволяющие различными способами определить присутствие инфекции в организме. Но что же выбрать? В чем основное отличие этих методов диагностики? Предлагаем разобраться в этих вопросах и сравнить данные методы лабораторной диагностики.
Что выявляет метод?
ПЦР (полимеразноцепная реакция) – анализ, выполненный данным методом, позволяет выявить существующие в настоящее время инфекционные агенты. Другими словами выявляется ДНК или РНК возбудителя инфекции.
ИФА (иммуноферментный анализ) – основан на выявлении не самой инфекции, а выявлении специфических антител (иммуноглобулины, Ig). Эти самые антитела вырабатываются лейкоцитами и являются своеобразным ответом на появление в организме чужеродного генетического материала. Антитела к одному возбудителю могут отличаются между собой по срокам появления: IgM – острый период заболевания; IgG – хронический процесс, или реакция на прививку.
Специфичность метода
ПЦР относится к разряду высокоспецифичных лабораторных методов исследования, то есть, если, например, выявляем хламидию, то найдем как раз только ее.
В случае проведения анализа методом ИФА, то возможен ложноположительный результат. Это происходит по той причине, что несколько микробов могут иметь схожую антигенную структуру, в результате чего к ним будут вырабатываться «похожие» антитела.
Что случит материалом для исследования?
ПЦР: венозная кровь, соскоб из урогенитального тракта, слюна, моча, эякулят (сперма), ликвор (спинномозговая жидкость) и др.
ИФА: кровь.
Можно ли выявить возбудителя на ранней стадии?
ПЦР дает возможность выявить возбудителя инфекции на момент исследования. Он чувствителен уже на самых ранних этапах инфицирования, даже когда еще нет признаков заболевания. Что касается метода ИФА, то первое время результат анализа будет отрицательным. Это связано с тем, что для выработки антител надо время. IgM появляются в крови на 5-7 сутки, igG через 2-4 недели.
Например, при проведении анализа методом ИФА на ранней стадии заболевания Вы можете столкнуться с ситуацией, когда Вы уже заражены какой-либо инфекцией, но при этом антител к ней еще нет либо их уровень находится ниже порога чувствительности тест-системы. Либо же наоборот – возбудителя уже нет в организме, а антитела еще выявляются.
Можно ли определить стадию инфекционного процесса?
Определить стадию процесса, наблюдать за динамикой заболевания можно ИФА методом. ПЦР-диагностика такой информации не предоставляет.
Результат анализа при выздоровлении. Каким он должен быть?
При выздоровлении анализ, выполненный методом ПЦР покажет «отрицательный» результат. В случае ИФА при выздоровлении IgM отрицательный или снижается, IgG может быть положительным.
Недостатки методов
ПЦР:
Дать однозначный ответ, какой метод лабораторной диагностики лучше невозможно. Какой анализ выполнить определяет врач, исходя из конкретной ситуации. Для комплексной оценки инфекции, в некоторых случаях, может потребоваться, как выявление самого возбудителя (ПЦР), так и определение антител к нему в организме пациента (ИФА).
Где сдать анализы в Харькове?
Сдать анализы в Харькове методом ПЦР и ИФА, а также выполнить ряд других лабораторных исследований Вы можете в лаборатории «ЦМЭИ». Мы предлагаем Вам получение максимально точных результатов анализов в минимальные сроки. Немаловажен также тот момент, что все это Вы можете получить по доступной цене и в комфортных условиях. Также в нашей лаборатории на Салтовке и в пунктах забора анализов по городу действуют различные выгодные пакетные предложения, с которыми Вы можете ознакомиться на нашем сайте.
У Вас остались вопросы? Звоните: (0572) 65-20-14; (063) 588-84-98; (099) 037-58-73; (068) 180-02-80. Наши администраторы обязательно помогут Вам разобраться в них. Будем рады Вам помочь!
ПЦР и ИФА-диагностика
НПЦР и ИФА-диагностика — в чем разница?
Как и анализ ПЦР, ИФА-методы широко применяются в современной лабораторной диагностике ИППП. При чем врач может назначить Вам не только сдать ПЦР анализ, но и провести ИФА — диагностику для выявления определенной инфекции. С непрофессиональной точки зрения пациента подобный комплекс исследования вызывает много вопросов, поскольку все лабораторные методы исследования на первый взгляд кажутся абсолютно одинаковыми. Но, несмотря на внешнюю схожесть, разница между ПЦР, ИФА и другими иммунологическими исследованиями все же есть.
ИФА-анализ основан на выявлении не самой инфекции, а ее продуктов жизнедеятельности — белов-маркеров. ПЦР-анализ напротив выявляет существующие в настоящее время инфекционные агенты (бактерии, вирусы, грибы).
РИФ, как и другие иммунологические методы исследования, тоже несколько уступает достоверности ПЦР-инфекции. Суть РИФ такова, при проведении анализа антигены возбудителя (молекулы белка, свойственные инфекции) ищут антителами к ним. Если антитело «обнаружит» белок, антиген инфекции, значит потенциально человек инфицирован. Однако свойство антитела таково, что они могут реагировать не с одним, а с разными антигенами — так называемые перекрестно-реагирующие антигены. Из-за этого специфичность (способность метода выявлять лишь тот инфекционный агент, для которого данный метод исследования назначен) у РИФ чуть ниже, чем у ПЦР.
Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать. Обычно это происходит вследствие нескольких причин:
Подводя итоги, можно сказать, что и ИФА, и ПЦР-анализы сами по себе не являются панацеей в диагностике инфекций. Нельзя одной ПЦР или ИФА-диагностикой заменить все существующие методы исследования, ими можно лишь дополнить их, позволив всем методам достигнуть реальных, точных, достоверных результатов.
Провести комплексную лабораторную диагностику, сдать ПЦР, ИФА и другие анализы Вы можете в медицинском центре «Евромедпрестиж».
Антитела к цитоплазме нейтрофилов, NSCA класса IgА
РПГА с сальмонеллёзным диагностикумом (О-антиген )(anti-Salmonella A,B,C1,C2,D,E )
Исследования основных параметров клеточного иммунитета: подсчет лейкоцитов, лимфоцитов, нетрофилов, CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD56, CD4/CD8, CD19
Расширенное иммунологическое исследование клеточного иммунитета: подсчет лейкоцитов, лимфоцитов, нейрофилов, CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD38, CD54, CD71, CD95, CD56, CD4/CD8, CD19, CD95
Что такое ифа и пцр диагностика инфекций
ПЦР: СВЕРХЧУВСТВИТЕЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ
ПЦР — ЭТО МЕТОД ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ, НАПРАВЛЕННЫЙ НА ВЫЯВЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ. ТРЕХБУКВЕННЫЙ ВАРИАНТ — ЭТО АББРЕВИАТУРА НАЗВАНИЯ «ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ». СОБСТВЕННО, В ЭТОМ НАЗВАНИИ И ОТРАЖАЕТСЯ СУТЬ МЕТОДА
Метод ПЦР был разработан в 1983 году Кэри Мюллисом, за что он был удостоен Нобелевской премии. Изначально метод использовался в основном для научных целей, но затем, разглядев его перспективность и эффективность, метод стали продвигать в практическую медицину.
За генетическую информацию в живом организме любого размера отвечает ДНК — двухспиральная дезоксирибонуклеиновая кислота, состоящая из последовательности четырех нуклеотидов, которые принято обозначать буквами А (аденин), Г (гуанин), Т (тимидин) и Ц (цитозин). Одно из основных правил генетики – правило комплементарности, то есть нуклеотиды соседних спиралей ДНК соединяются только в определеном порядке: А с Т, Г с Ц, и никак иначе. У каждого живого создания (бактерия, вирус, рыба, зверь) – своя ДНК, причем для выявления конкретного организма достаточно иметь лишь небольшой участок этого хранилища генетической информации. Некоторые виды микроорганизмов, например, вирус иммунодефицита человека, хранят генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК, но и ее фрагменты можно находить с помощью ПЦР. Именно на обнаружении этого небольшого, но уникального для каждого отдельного организма участка и построен принцип ПЦР. Для каждого возбудителя создан свой специфический генетический детектор, эталонный фрагмент ДНК, который по принципу комплементарности точно обнаруживает «свой» фрагмент ДНК и запускает реакцию создания огромного количества его копий. Один цикл ПЦР длится около трех минут, количество копий растет в геометрической прогрессии. Таким образом, за несколько часов количество фрагментов увеличивается в несколько миллиардов раз.
ДОСТОИНСТВА
Понятно, что теперь определить, какой возбудитель у данной конкретной инфекции, достаточно легко. Какую же практическую выгоду получает человек, когда отправляется на поиски вредоносных микроорганизмов, вооруженный ПЦР?
— Безусловно, одно из главных достоинств — это универсальность метода. ПЦР позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК, даже когда бессильны другие методы. Оборудование, используемое для ПЦР, стандартно, оно не зависит от того, что именно и где именно мы ищем.
— Следующий плюс — высокая специфичность. В материале, направленном на исследование, определяется уникальная последовательность нуклеотидов, характерная только для конкретного возбудителя. Таким образом, можно говорить, что специфичность метода достигает 100%. Кроме того, это позволяет одновременно, в одном и том же материале, проводить поиск нескольких возбудителей без какого-либо ущерба для качества ответа.
— Метод ПЦР обладает высочайшей чувствительностью – мы уже говорили о том, что возможно найти всего один фрагмент генетического материала возбудителя.
— Несомненное преимущество метода – оперативность. Постановка реакции занимает несколько часов, таким образом, вся диагностика, от момента сдачи материала на анализ до получения результата, отнимет всего один день.
— При помощи ПЦР определяют возбудителя, а не реакцию на его внедрение со стороны организма. Таким образом, появилась возможность точно диагностировать заболевание еще в инкубационном периоде, когда нет никаких клинических или лабораторных признаков болезни. Когда нужно делать?
Когда следует бежать в лабораторию, чтобы проанализировать итоги вашего летнего отпуска?
Специалисты советуют делать это в следующих случаях: выделения, зуд, чувство жжения в области половых органов, резко изменившийся запах от половых органов, дискомфорт при мочеиспускании, необычный характер выделений (цвет, количество, консистенция), случайный половой контакт без применения презерватива. Безусловно, ПЦР — мощный и эффективный диагностический инструмент, позволяющий быстро и точно найти возбудителей очень многих инфекций. Чаще всего его используют для диагностики именно заболеваний, передающихся половым путем.
В любом случае нельзя ограничиваться только одним методом. Лучше всего комбинировать различные методы исследования – помимо определения самого возбудителя методом ПЦР? необходимо оценивать и иммунный ответ организма, который определяется традиционными серологическими методами, например — ИФА.
ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)
В основе иммуноферментного анализа (ИФА) лежит иммунная реакция антигена с антителом.
Для исследования методом ИФА используется кровь из вены, полученная натощак.
Иммуно-ферментный анализ (ИФА) применяется в диагностике урогенитальных инфекций для выявления наличия в сыворотке крови специфических иммуноглобулинов (Ig или антител) — белков, вырабатываемых клетками иммунной системы, направленных на борьбу с внедрившимся в организм инфекционным агентом. Связываясь с микробной клеткой или продуктами ее жизнедеятельности, иммуноглобулины нейтрализуют их и способствуют их элиминации. Таким образом, иммуноглобулины представляют собой суть гуморального иммунитета, то есть иммунитета, обусловленного субстанциями, содержащимися в жидкостях тела, в отличие от клеточного иммунитета, связанного с присутствием специальных клеток иммунной системы.
На каждый вид (и даже подвид) возбудителя вырабатываются свои определенные антитела, которые, как правило, не связываются ни с каким другим инфекционным агентом. Благодаря этому определение антител обеспечивает достаточно высокую специфичность анализа. Из пяти классов Ig в диагностике инфекционных заболеваний чаще всего используются Ig трех типов А, M и G. Прежде всего нужно помнить, что существует некоторый промежуток времени с момента внедрения инфекционного агента в организм и до момента появления антител в сыворотке крови — это так называемый серонегативный период. Для различных инфекций и отдельных индивидуумов он может быть неодинаков, в среднем же для возбудителей урогенитальных заболеваний он составляет 1-4 недели.
РАСХОЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИФА И ПЦР
Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать. Обычно это происходит вследствие нескольких причин:
— «Иммунологический след» — «след» от уже перенесенной инфекции. В ответ на внедрение инфекции организм начинает вырабатывать антитела, в частности, антитела класса IgG. Эти антитела «улавливает» ИФА-анализ. Метод ПЦР реагирует только на наличие молекул ДНК инфекции в организме. В такой ситуации ПЦР-анализ дает отрицательный результат, а ИФА — положительный. При чем в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы положительный результат ИФА-диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления.
— Разница в оборудовании для проведения диагностики. Получение положительного результата ИФА и ПЦР — отрицательного, может быть вызвано использованием особых тест-систем в ИФА-анализе, которые выявляют все виды бактерий, в том числе те, которые в определенном количеств в норме содержатся в организме человека. Тест-система, используемая в ПЦР-анализе, может быть основана только на определении особого вида болезнетворных бактерий. Например, тест-система для ИФА-диагностики настроена на выявление всех видов хламидий : С. Pneumonia, C. Pecorum, C. Psittaci, а в проведении ПЦР-анализа может быть использована тест-система, выявляющая только С. Trachomatis. Вот почему ИФА-анализ на С. Pneumonia будет положительным, а ПЦР — отрицательным.
— Разница в используемом материале.
Материал для ПЦР получают из места предполагаемой локализации инфекции. Для ИФА-диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР-диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, хламидии могут локализироваться в разных местах организма. Вызвав хронический сальпингит, проведенный в области шейки матки анализ ПЦР хламидии не обнаружит. Но ИФА-диагностика все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс.
— Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР-диагностики. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдать врач-лаборант в том случае, если инфекция «свежая», т. е. даже при наличии определенных симптомов уровень антител класса IgG в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. Для половых инфекций подобный период «молчания» ИФА-диагностики может достигать двух недель.
Анализы на ЗППП — виды, особенности проведения, правила подготовки
ЗППП анализы — это отдельный вид лабораторных исследований, направленных на обнаружение инфекционных заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), в ходе проведения клинической диагностики.
К списку таких заболеваний традиционно относятся: ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), генитальный герпес, гонорея, микоплазмоз, папилломавирусная инфекция, сифилис, трихомониаз, уреаплазмоз, хламидиоз, цитомегаловирус.
Показания
Необходимость проведения анализов на ЗППП возникает при наличии обоснованных подозрений заражения (половой контакт с носителем ЗППП), а также возникновении симптомов, которые могут свидетельствовать об инфицировании:
сыпь, зуд или покраснение кожи в генитальной области;
боль и жжение во время мочеиспускания;
примеси крови в моче;
генитальные выделения жёлтого или белого цвета с резким неприятным запахом;
болевой синдром в области половых органов или брюшной полости;
бесплодие или половые дисфункции (как часть комплексной диагностики).
Виды анализов ЗППП
Существует 4 основных анализа на ЗППП: мазок, бакпосев, ИФА, ПЦР. Выбор конкретного типа исследования делает врач, исходя из жалоб пациента и общей клинической картины.
Мазок
Исследуемый материал — верхний слой слизистой оболочки мочеиспускательного канала у мужчин или влагалища и цервикального канала у женщин. Отобранные образцы изучаются под микроскопом, а результат может быть получен в течение 30-60 минут.
Исследование позволяет выявить таких возбудителей ЗППП, как гарднереллы, гонококки, трихомонады, уреаплазмы, хламидии, а также ряд грибковых инфекций.
Недостатки: малоинформативно на начальных стадиях ЗППП.
Бакпосев
Исследуемый материал — кровь, моча, кал, слюна, генитальные выделения. Отобранные образцы помещаются в специальную питательную среду, способствующую активному размножению предполагаемого возбудителя для последующего его изучения. Результат может быть получен через 3-10 дней, в зависимости от особенностей анализа.
Исследование помогает не только установить наличие в организме конкретного возбудителя, но и определить его чувствительность к определённым группам антибиотиков. Бакпосев эффективен для обнаружения гарднерелл, гонококков, кандидоза, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомонад.
Недостатки: применим только к инфекциям, которые можно вырастить в питательных средах.
ИФА (иммуноферментный анализ)
Исследуемый материал — кровь, моча, урогенитальные соскобы. Суть анализа — обнаружение в образцах специальных защитных веществ-антител, которые всегда выделяются организмом в ответ на присутствие патогенного возбудителя. Результат может быть получен в течение суток.
Применяется для обнаружения практически любых возбудителей ЗППП, однако в силу высокой специфичности исследования требует постановки предварительного диагноза, то есть уточнения патогена, который должен выявить анализ.
Недостатки: исследования не всегда информативны на ранних стадиях ЗППП, поскольку на некоторые инфекции организм вырабатывает антитела не сразу.
ПЦР (полимеразная цепная реакция)
Исследуемый материал — кровь, моча, урогенитальные соскобы или выделения. Суть метода — выявление фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в исследуемом образце. Результат может быть получен через 3-4 часа.
Позволяет с абсолютной точностью обнаружить присутствие в организме любого возбудителя ЗППП, вне зависимости от стадии заболевания.
Недостатки: провести такой анализ можно не в каждой лаборатории.
Как подготовиться к сдаче анализов
Правила подготовки к сдаче анализов на ЗППП зависят от вида предстоящего исследования.
Общие рекомендации. Кровь и моча всегда сдаются утром натощак или минимум через 8 часов после употребления пищи. Приём лекарственных препаратов в период проведения анализов ЗППП — только по согласованию с врачом.
Мазок, посев. За 1-2 дня до сдачи образцов отказаться от половых контактов и гигиенических процедур с применением мыла или средств интимной гигиены (включая спринцевание у женщин).
ИФА. За 24 часа до сдачи материала отказаться от спиртного, а также обильного употребления жирной пищи. За час до сдачи образцов — воздержаться от курения.
ПЦР. При сдаче урогенитальных жидкостей (сперма, секрет предстательной железы и пр.) рекомендуется половое воздержание в течение 2-3 суток. Образцы слюны сдаются утром натощак, до выполнения любых гигиенических процедур по санации полости рта.
Интерпретация результатов
Правильно интерпретировать результаты анализов может только лечащий врач, с учётом истории болезни пациента, а также наличия у него других заболеваний. Самостоятельное трактование исследований на ЗППП по «советам из интернета» чревато неточностями и неверным пониманием фактического состояния больного.
Блог TreeGene
Метод ИФА позволяет получить информацию о контакте иммунной системы человека с каким-либо инфекционным агентом. Является косвенным методом диагностики инфекции, то есть не позволяющим оценить напрямую присутствие инфекции в организме человека (за исключением выявления антигенов в пробе). Оценка идет по реакции иммунитета человека в ответ на внедрение инфекции в организм. При этом, в организме человека образуются защитные вещества называемые антителами, их то и исследуют при ИФА.
Антитела, которые обычно исследуют в медицинских лабораториях, относятся к классам M и G и Total. Лечащий врач, анализируя наличие или отсутствие тех или иных классов антител, делает вывод о периоде инфекционного процесса – острый, хронический в стадии ремиссии или хронический в стадии обострения, основываясь на реакцию иммунитета организма.
ПЦР анализ – полимеразноцепная реакция 
ПЦР анализ – полимеразноцепная реакция, относится к молекулярно-генетическим методам исследования, при котором на исследование берется образец, где непосредственно может присутствовать интересующийся инфекционный агент. Это может быть образец плазмы, полученной из венозной крови (из этого биоматериала исследуют вирусы гепатитов, ЦМВ, и др), на инфекции передающиеся половым путем обычно берут соскоб из урогенитального тракта (интересующийся агент – хламидия, микоплазмы, уреаплазмы и др).
ПЦР анализ относится к прямым методам выявления возбудителей инфекций, и позволяет сделать вывод о непосредственном наличии инфекционного агента у человека на момент исследования.
Для получения наиболее полной картины заболевания необходимы данные как по ИФА анализу так и по ПЦР. Грамотное назначение и правильное сочетание этих методов исследования позволяют обоснованно корректировать лечение.